| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 石油污染土壤情况概述 | 第12页 |
| 1.1.1 石油污染土壤现状 | 第12页 |
| 1.1.2 石油污染土壤的危害 | 第12页 |
| 1.2 土壤石油污染的修复方法 | 第12-14页 |
| 1.2.1 植物修复 | 第13页 |
| 1.2.2 利用花卉植物修复石油污染土壤 | 第13-14页 |
| 1.3 逆境胁迫下植物的适应性响应过程和分子机制 | 第14-21页 |
| 1.3.1 植物逆境条件下的转录调控 | 第14-16页 |
| 1.3.2 植物ER Stress与UPR | 第16页 |
| 1.3.3 非生物胁迫与植物细胞自噬 | 第16-17页 |
| 1.3.4 植物ROS介导的UPR信号通路 | 第17-18页 |
| 1.3.5 植物逆境与热休克蛋白 | 第18-19页 |
| 1.3.6 小热休克蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.7 小热休克蛋白与氧化胁迫耐受 | 第20-21页 |
| 1.4 2A肽与多基因共表达 | 第21-23页 |
| 1.4.1 2A肽概述 | 第21-22页 |
| 1.4.2 2A肽的种类 | 第22页 |
| 1.4.3 多基因共表达策略 | 第22-23页 |
| 1.5 酿酒酵母与基因功能研究 | 第23页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因的克隆 | 第25-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第25页 |
| 2.1.2 试验试剂与仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2 紫茉莉根部总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第27-28页 |
| 2.3 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因保守区的扩增 | 第28-31页 |
| 2.3.1 Hsp18.2保守区PCR扩增体系 | 第28-29页 |
| 2.3.2 Hsp17.7保守区PCR扩增体系 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR目的片段的胶回收 | 第29-30页 |
| 2.3.4 目的片段与TA克隆载体连接 | 第30页 |
| 2.3.5 连接产物的转化与阳性克隆的筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.6 菌落PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.4 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因3’端克隆 | 第31-32页 |
| 2.4.1 紫茉莉Hsp18.2基因3’端克隆 | 第31-32页 |
| 2.4.2 紫茉莉Hsp17.7基因3’端克隆 | 第32页 |
| 2.5 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因5’端克隆 | 第32-33页 |
| 2.5.1 用RNase H RNA酶降解cDNA第一链结合的RNA | 第32-33页 |
| 2.5.2. 酶解产物的纯化 | 第33页 |
| 2.5.3 纯化cDNA加胞嘧啶尾巴结构 | 第33页 |
| 2.6 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因5’端克隆 | 第33-37页 |
| 2.6.1 紫茉莉Hsp18.2基因5’端克隆 | 第34-35页 |
| 2.6.2 紫茉莉Hsp17.7基因5’端克隆 | 第35-36页 |
| 2.6.3 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7全长基因的克隆 | 第36-37页 |
| 2.7 结果与分析 | 第37-39页 |
| 2.7.1 紫茉莉根部总RNA的提取 | 第37页 |
| 2.7.2 PCR反应扩增紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7基因全长 | 第37-39页 |
| 2.8 Hsp18.2与Hsp17.7基因的BLAST分析 | 第39页 |
| 2.9 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 Hsp18.2-Flag与Hsp17.7-HA与及融合基因表达框的构建 | 第40-47页 |
| 3.1 试验材料 | 第40页 |
| 3.2 试验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.2.2. 紫茉莉Hsp18.2-Flag与Hsp17.7-HA的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 紫茉莉Hsp18.2与Hsp17.7融合基因Hsp-fusion的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.4 目的基因的TA克隆及连接转化 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-45页 |
| 3.3.1 PCR扩增Hsp18.2-Flag、Hsp17.7-HA与Hsp-fusion基因 | 第44-45页 |
| 3.3.2 三种重组克隆载体的菌落PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 三种基因的酿酒酵母表达载体的构建与遗传转化 | 第47-57页 |
| 4.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 试验试剂与试验仪器 | 第47页 |
| 4.1.2 培养基 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-53页 |
| 4.2.1 目的基因质粒的提取 | 第48-49页 |
| 4.2.2 重组质粒和酿酒酵母表达载体的双酶切和回收 | 第49-50页 |
| 4.2.3 双酶切后的目的片段与酵母表达载体的连接、转化和鉴定 | 第50页 |
| 4.2.4 三种重组表达载体的酿酒酵母转化 | 第50-51页 |
| 4.2.5 酿酒酵母转化子的鉴定 | 第51-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
