| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第10-26页 |
| 1.1 古菌概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 古菌的发现及特点 | 第10-11页 |
| 1.2 硫化叶菌 | 第11-12页 |
| 1.2.1 硫化叶菌的概述 | 第11页 |
| 1.2.2 硫化叶菌的遗传表达系统 | 第11-12页 |
| 1.2.2.1 穿梭载体 | 第11-12页 |
| 1.3 DNA损伤与修复途径 | 第12-16页 |
| 1.3.1 DNA损伤类型 | 第12-13页 |
| 1.3.2 DNA损伤修复途径 | 第13-16页 |
| 1.4 HJ解离酶 | 第16-25页 |
| 1.4.1 原核生物解离酶 | 第16页 |
| 1.4.2 真核生物解离酶 | 第16-18页 |
| 1.4.3 真核生物解离酶的调控机制 | 第18-23页 |
| 1.4.4 古菌解离酶 | 第23-24页 |
| 1.4.5 Hje前期研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 第2章 Hje突变体过表达菌株表型的分析 | 第26-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株及培养基 | 第26页 |
| 2.1.2 材料 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 目的蛋白的质谱鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.2 突变体质粒的构建 | 第28页 |
| 2.2.3 突变体质粒的电转化与过表达菌株单克隆的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.4 大肠杆菌中突变体蛋白的表达和纯化 | 第29页 |
| 2.2.5 古菌中突变体蛋白的表达和纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE及Western blotting分析目的蛋白 | 第30页 |
| 2.2.7 生长曲线的测定 | 第30页 |
| 2.2.8 蛋白核酸酶活性的检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-47页 |
| 2.3.1 古菌中Hje(有无标签)蛋白的纯化 | 第31-35页 |
| 2.3.2 Hje突变体过表达菌株的筛选 | 第35-37页 |
| 2.3.3 Hje各突变体蛋白的表达和纯化 | 第37-40页 |
| 2.3.3.1 Hje各突变体pET22b质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.3.3.2 各突变体蛋白的大肠杆菌中表达纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.3.3 各突变体蛋白古菌中表达纯化 | 第39-40页 |
| 2.3.4 Western检测突变体蛋白的大小变化 | 第40-41页 |
| 2.3.5 各突变体过表达菌株生长曲线的测定 | 第41-46页 |
| 2.3.6 Hje各突变体核酸酶活性的体外检测 | 第46-47页 |
| 2.4 总结与讨论 | 第47-50页 |
| 第3章 Hje可能的翻译后修饰研究 | 第50-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.2.1 磷酸酶处理实验 | 第50页 |
| 3.2.2 损伤剂MMS处理实验 | 第50-51页 |
| 3.2.3 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)富集目的蛋白 | 第51页 |
| 3.3 实验结果 | 第51-59页 |
| 3.3.1 菌株Sis/pSeSD-Hje-N-His的构建 | 第51-53页 |
| 3.3.2 古菌中Hje-N-His蛋白的表达、纯化 | 第53页 |
| 3.3.3 Sis/pSeSD-Hje-N-His生长曲线的测定 | 第53-54页 |
| 3.3.4 磷酸酶处理Hje-N-His、Hje-C-His蛋白 | 第54-56页 |
| 3.3.5 损伤剂MMS处理后Hje变化分析 | 第56-58页 |
| 3.3.6 免疫共沉淀富集古菌中修饰状态的Hje | 第58-59页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第59-62页 |
| 第4章 总结与展望 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
| 附录一 药品和试剂 | 第66-67页 |
| 附录二 本文所涉及的培养基及配方 | 第67-69页 |
| 附录三 S. is landicus E233S感受态细胞制备、电转化及菌株培养 | 第69-70页 |
| 附录四本文所用的引物、构建的质粒及菌株 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第79页 |
