| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 草地贪夜蛾细胞 | 第11页 |
| 1.2 乙酰胆碱酯酶参与哺乳动物细胞的凋亡 | 第11-12页 |
| 1.2.1 乙酰胆碱酯酶的经典功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 乙酰胆碱酯酶参与哺乳动物细胞凋亡 | 第12页 |
| 1.3 昆虫细胞凋亡源于内源激素调控或外界因子的诱导 | 第12-13页 |
| 1.4 植物次生代谢产物花椒毒素、麦黄酮、喜树碱 | 第13页 |
| 1.5 细胞凋亡检测的方法 | 第13-15页 |
| 1.5.1 倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态 | 第13-14页 |
| 1.5.2 Caspase家族参与细胞凋亡 | 第14页 |
| 1.5.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.6 RNAi在昆虫中的应用 | 第15-16页 |
| 1.6.1 RNAi的原理 | 第15-16页 |
| 1.6.2 RNAi技术在昆虫中的应用 | 第16页 |
| 1.7 实时荧光定量 | 第16-17页 |
| 1.7.1 定量RT-PCR的概念 | 第16页 |
| 1.7.2 定量RT-PCR的原理 | 第16-17页 |
| 1.8 课题研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 植物次生物质诱导细胞凋亡及AChE基因表达的研究 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料、试剂、仪器 | 第18-20页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂药品 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 常用试剂溶液 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 花椒毒素、麦黄酮、喜树碱诱导正常细胞,倒置显微镜下观察 | 第20页 |
| 2.2.2 流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第20-21页 |
| 2.2.3 Caspase 3检测细胞活性 | 第21-22页 |
| 2.2.4 凋亡细胞AChE基因表达量的检测 | 第22页 |
| 2.2.5 Western印迹杂交对比检测经过诱导后AChE蛋白的表达变化 | 第22-25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-34页 |
| 2.3.1 花椒毒素、麦黄酮和喜树碱诱导昆虫Sf9细胞凋亡显微镜下初步观察 | 第25-28页 |
| 2.3.2 流式细胞仪检测细胞凋亡率 | 第28-29页 |
| 2.3.3 Caspase 3酶活的测定 | 第29-30页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR检测经过喜树碱诱导后AChE基因的表达量 | 第30-32页 |
| 2.3.5 Western印迹杂交对比检测AChE蛋白的表达量 | 第32-34页 |
| 第三章 dsRNA干扰昆虫细胞及对AChE的沉默作用 | 第34-51页 |
| 3.1 实验材料、试剂、与仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.1 昆虫细胞株、菌株、质粒载体 | 第34页 |
| 3.1.2 试剂药品 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 3.1.4 培养基 | 第34-35页 |
| 3.1.5 常用试剂溶液 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-44页 |
| 3.2.1 扩增AChE基因所需要的cDNA | 第35-37页 |
| 3.2.2 AChE引物设计及合成 | 第37页 |
| 3.2.3 克隆AChE基因片段 | 第37-41页 |
| 3.2.4 dsRNA的形成 | 第41-42页 |
| 3.2.5 昆虫细胞的应用 | 第42-44页 |
| 3.2.6 dsRNA干扰昆虫细胞及AChE实时荧光定量表达分析检测 | 第44页 |
| 3.2.7 dsRNA干扰昆虫细胞及AChE蛋白免疫印迹分析检测 | 第44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-51页 |
| 3.3.1 昆虫细胞总RNA的提取与检测 | 第44-45页 |
| 3.3.2 昆虫细胞AChE部分基因片段的扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.3 昆虫细胞AChE部分片段检测 | 第46-47页 |
| 3.3.4 昆虫细胞双链RNA的形成 | 第47页 |
| 3.3.5 dsRNA转染昆虫细胞后AChE基因的表达量 | 第47-50页 |
| 3.3.6 RNAi后AChE蛋白的表达量 | 第50-51页 |
| 讨论与展望 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
