| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 中英文缩略表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第12页 |
| 1.2 肺表面活性蛋白研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 肺表面活性蛋白概述 | 第12-14页 |
| 1.2.2 SP-A和SP-D参与肺脏天然免疫 | 第14-15页 |
| 1.2.3 肺表面活性蛋白的表达调控 | 第15页 |
| 1.2.4 肺表面活性蛋白的体外表达 | 第15-16页 |
| 1.3 猪繁殖与呼吸综合症研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 猪繁殖与呼吸综合症概述 | 第16页 |
| 1.3.2 PRRSV的生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.3.3 PRRSV感染的临床症状 | 第17页 |
| 1.3.4 PRRSV的预防和检测 | 第17页 |
| 1.4 断奶应激对仔猪呼吸系统的影响 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 质粒、菌株、毒株、细胞系和实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要药品、试剂及仪器设备 | 第19-21页 |
| 2.1.3 培养基及其配制方法 | 第21页 |
| 2.1.4 缓冲液及其配制方法 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.2.1 总RNA提取及逆转录 | 第22-23页 |
| 2.2.2 基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第24-28页 |
| 2.2.4 质粒转染 | 第28页 |
| 2.2.5 高表达SP-A、SP-D稳转细胞系的筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.6 从细胞培养上清中纯化SP-A和SP-D | 第29-30页 |
| 2.2.7 PRRSV的增殖与病毒滴度的测定 | 第30页 |
| 2.2.8 重组SP-A和SP-D与PRRSV结合活性测定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 重组SP-A和SP-D抑制PRRSV感染Marc-145细胞 | 第31页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2.11 Western blot | 第32-33页 |
| 2.2.12 双荧光素酶报告系统检测SPs之间相互作用 | 第33页 |
| 2.2.13 统计学分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 SP-A、SP-D结合PRRSV及抑制其感染的研究 | 第34-39页 |
| 3.1.1 SP-A、SP-D真核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.2 SP-A、SP-D稳转CHO细胞系的筛选及鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.3 Western blot鉴定细胞培养上清中纯化SP-A、SP-D蛋白 | 第37页 |
| 3.1.4 SP-A、SP-D与PRRSV体外结合活性测定 | 第37-38页 |
| 3.1.5 SP-A、SP-D抑制PRRSV感染Marc-145细胞 | 第38-39页 |
| 3.2 PRRSV感染猪肺组织中SPs的表达 | 第39-42页 |
| 3.2.1 PRRSV感染猪肺组织中SPs的表达变化 | 第39-40页 |
| 3.2.2 GPR116在PRRSV感染猪肺组织中的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.3 断奶应激仔猪肺组织中表面活性蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 3.3 SP-C和SP-D之间相互作用的研究 | 第42-45页 |
| 3.3.1 SP-C启动子双荧光素酶报告载体的构建 | 第43页 |
| 3.3.2 超表达SP-D对SP-C启动子活性的影响 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 SP-A、SP-D结合PRRSV及抑制其感染的研究 | 第45页 |
| 4.2 PRRSV感染猪及断奶应激仔猪肺组织中SPs的表达 | 第45-47页 |
| 4.2.1 PRRSV感染猪肺组织中SPs的表达 | 第45-46页 |
| 4.2.2 GPR116在PRRSV感染猪肺组织中的表达 | 第46页 |
| 4.2.3 断奶应激仔猪肺组织中SPs的表达 | 第46-47页 |
| 4.3 SP-C和SP-D的相互作用 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
