| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第一部分 文献综述 布鲁氏菌分子致病机制的研究进展 | 第17-41页 |
| 1 布鲁氏菌病概述 | 第17-20页 |
| 1.1 布鲁氏菌的种属特性 | 第17-18页 |
| 1.2 布鲁氏菌病 | 第18-20页 |
| 2 布鲁氏菌毒力的研究现状 | 第20-22页 |
| 2.1 布鲁氏菌的基本生物学性状 | 第20页 |
| 2.2 布鲁氏菌的基因组学研究 | 第20-21页 |
| 2.3 布鲁氏菌的毒力因子 | 第21-22页 |
| 3 布鲁氏菌的毒力调控系统 | 第22-28页 |
| 3.1 二元调控系统 | 第22-23页 |
| 3.2 Ⅳ型分泌系统 | 第23-25页 |
| 3.3 密度感应系统 | 第25-26页 |
| 3.4 磷酸转移酶系统 | 第26-27页 |
| 3.5 小调控RNA和热休克蛋白 | 第27-28页 |
| 4 布鲁氏菌胞内生存机制的研究 | 第28-39页 |
| 4.1 布鲁氏菌可在不同宿主细胞中生存 | 第28-30页 |
| 4.2 不同状态的布鲁氏菌的胞内生存 | 第30-32页 |
| 4.3 布鲁氏菌对胞内生存环境的生理适应 | 第32-33页 |
| 4.4 布鲁氏菌的胞内生存与宿主细胞凋亡的关系 | 第33页 |
| 4.5 布鲁氏菌的胞内生存与宿主细胞自噬的关系 | 第33-35页 |
| 4.6 布鲁氏菌的胞内生存与宿主细胞溶酶体融合的关系 | 第35-36页 |
| 4.7 布鲁氏菌在胞内生存过程中对宿主免疫应答的调节 | 第36-39页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第39-41页 |
| 第二部分 实验研究 | 第41-129页 |
| 实验一 TCS TceSR和TcfSR突变株的构建及鉴定 | 第41-63页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-50页 |
| 1.1 材料 | 第41-42页 |
| 1.2 方法 | 第42-50页 |
| 2 结果 | 第50-60页 |
| 2.1 目的基因N端与C端的扩增 | 第50-52页 |
| 2.2 Kan抗性基因的扩增 | 第52页 |
| 2.3 同源重组序列的融合 | 第52页 |
| 2.4 突变株突变载体的构建 | 第52-53页 |
| 2.5 突变株的筛选与鉴定 | 第53-56页 |
| 2.6 缺失株 16MΔTceSR和 16MΔTcfSR的遗传稳定性检测 | 第56-57页 |
| 2.7 生长曲线 | 第57-58页 |
| 2.8 布鲁氏菌在体外应激条件下的生存能力 | 第58页 |
| 2.9 体外刺激环境下的长期生存实验 | 第58-60页 |
| 2.10布鲁氏菌的聚集现象 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 3.1 布鲁氏菌TCS TceSR和TcfSR的选择 | 第60-61页 |
| 3.2 以T载体为自杀载体快速构建布鲁氏菌突变株 | 第61页 |
| 3.3 布鲁氏菌电转化条件的优化 | 第61-62页 |
| 3.4 TCS TceSR和TcfSR失活后对布鲁氏菌生长特性的影响 | 第62页 |
| 3.5 TCS TceSR和TcfSR调控布鲁氏菌抵抗外界环境的刺激 | 第62页 |
| 4 小结 | 第62-63页 |
| 实验二 TCS TceSR和TcfSR功能失活后相关毒力基因表达分析 | 第63-89页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-69页 |
| 1.1 材料 | 第64-67页 |
| 1.2 方法 | 第67-69页 |
| 2 结果 | 第69-85页 |
| 2.1 引物的特异性分析 | 第69-70页 |
| 2.2 胞内转录最佳侵染时间的确定 | 第70页 |
| 2.3 差异基因表达分析 | 第70-81页 |
| 2.4 体外刺激条件下目的基因的相对表达分析 | 第81-84页 |
| 2.5 细菌在不同生长时期TCS TceSR和TcfSR对virB1和vjbR的调控作用 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-88页 |
| 3.1 TceSR和TcfSR的胞内高效表达时间 | 第85页 |
| 3.2 TCS TceSR和TcfSR功能缺失后相关毒力基因的胞内转录水平分析 | 第85页 |
| 3.3 TCS TceSR和TcfSR功能缺失后胞内存活相关毒力基因的体外转录分析 | 第85-87页 |
| 3.4 TCS TceSR和TcfSR与virB1和vjbR的调控关系 | 第87-88页 |
| 4 小结 | 第88-89页 |
| 实验三 TCS TceSR和TcfSR对布鲁氏菌胞内生存的影响 | 第89-109页 |
| 摘要 | 第89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-94页 |
| 1.1 材料 | 第90-91页 |
| 1.2 方法 | 第91-94页 |
| 2 结果 | 第94-105页 |
| 2.1 布鲁氏菌对巨噬细胞的粘附侵袭能力 | 第94-95页 |
| 2.2 布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活能力 | 第95-96页 |
| 2.3 16MΔTceSR和 16MΔTcfSR不诱导巨噬细胞发生凋亡 | 第96-101页 |
| 2.4 16MΔTceSR和16MΔTcfSR诱导巨噬细胞发生不同水平的自噬 | 第101-104页 |
| 2.5 16MΔTceSR和 16MΔTcfSR可促进溶酶体的融合 | 第104-105页 |
| 3 讨论 | 第105-107页 |
| 3.1 TCS TceSR和TcfSR对巨噬细胞的粘附侵袭能力的影响 | 第105页 |
| 3.2 TCS TceSR和TcfSR对巨噬细胞内的生存能力的影响 | 第105-106页 |
| 3.3 TCS TceSR和TcfSR对宿主细胞凋亡的影响 | 第106-107页 |
| 3.4 TCS TceSR和TcfSR对宿主细胞自噬的影响 | 第107页 |
| 3.5 TCS TceSR和TcfSR对胞内布鲁氏菌与溶酶体融合的影响 | 第107页 |
| 4 小结 | 第107-109页 |
| 实验四 TCS TceSR和TcfSR突变株的小鼠体内毒力分析及其对免疫的影响 | 第109-129页 |
| 摘要 | 第109页 |
| 1 材料与方法 | 第109-116页 |
| 1.1 材料 | 第109-111页 |
| 1.2 方法 | 第111-116页 |
| 2 结果 | 第116-127页 |
| 2.1 细胞免疫 | 第116-117页 |
| 2.2 体液免疫 | 第117-118页 |
| 2.3 小鼠脾脏CFU计数检测突变株的毒力 | 第118-119页 |
| 2.4 组织病理学变化 | 第119-121页 |
| 2.5 突变株的免疫保护作用 | 第121-122页 |
| 2.6 Tces基因和Tcfs基因的扩增 | 第122-123页 |
| 2.7 重组质粒的构建与鉴定 | 第123-124页 |
| 2.8 TCES和TCFS重组蛋白的诱导表达 | 第124-125页 |
| 2.9 TCES和TCFS重组蛋白表达形式的确定 | 第125-126页 |
| 2.10 TCES和TCFS重组蛋白的纯化 | 第126-127页 |
| 2.11 Western Blot分析 | 第127页 |
| 3 讨论 | 第127-128页 |
| 3.1 细胞免疫水平分析 | 第127页 |
| 3.2 体液免疫水平分析 | 第127-128页 |
| 3.3 突变株的毒力和保护力分析 | 第128页 |
| 3.4 诊断抗原的反应原性分析 | 第128页 |
| 4 小结 | 第128-129页 |
| 第三部分 全文总结 | 第129-131页 |
| 本研究的创新点 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-155页 |
| 附录一 | 第155-161页 |
| 附录二 | 第161-175页 |
| 致谢 | 第175-177页 |
| 作者简介 | 第177-179页 |
| 导师评阅表 | 第179页 |
