| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 背景介绍 | 第10-22页 |
| 1.1 序言 | 第10-11页 |
| 1.2 三维重构和单颗粒电镜重构方法介绍 | 第11-12页 |
| 1.3 转录调控与组蛋白甲基化 | 第12-14页 |
| 1.4 Set1/COMPASS的背景介绍 | 第14-20页 |
| 1.4.1 Set1/COMPASS的同源蛋白功能介绍 | 第15页 |
| 1.4.2 Set1/COMPASS的研究进展 | 第15-20页 |
| 1.5 本课题的研究内容与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 表达带有标签的Set1/COMPASS复合体 | 第22页 |
| 2.1.2 Set1的底物H3/Octamer | 第22页 |
| 2.2 Set1/COMPASS复合体纯化 | 第22-31页 |
| 2.2.1 酵母克隆的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.1.1 扩增标签和筛选标记 | 第23页 |
| 2.2.1.2 酵母细胞感受态制备与转化 | 第23-24页 |
| 2.2.2 目的蛋白的检测 | 第24-26页 |
| 2.2.2.1 酵母细胞总蛋白的提取 | 第25页 |
| 2.2.2.2 Western Blotting | 第25-26页 |
| 2.2.3 酵母细胞的扩大培养 | 第26-27页 |
| 2.2.4 酵母蛋白的纯化及检测 | 第27-31页 |
| 2.2.4.1 IgG柱亲和层析初步纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.4.2 离子交换进一步纯化 | 第29-31页 |
| 2.2.4.3 酵母蛋白的纯化结果检测 | 第31页 |
| 2.3 Set1/COMPASS复合体甲基转移酶活性的检测 | 第31-32页 |
| 2.4 Set1/COMPASS复合体亚基定位—金颗粒标记 | 第32页 |
| 2.5 Set1与Octamer/NCP复合物的组装 | 第32-33页 |
| 2.5.1 直接孵育组装Set1/COMPASS与Octamer复合物 | 第33页 |
| 2.5.2 pulldown实验组装Set1/COMPASS与Octamer复合物 | 第33页 |
| 2.6 Set1/Paf1与H3相互作用的检测 | 第33-34页 |
| 2.7 电镜观察与分析 | 第34-38页 |
| 2.7.1 电镜样品的制备 | 第34-35页 |
| 2.7.2 Tecnai G~2 F20电镜基本操作 | 第35-37页 |
| 2.7.3 单颗粒电镜数据收集以及初步分析 | 第37-38页 |
| 第三章 Set1/COMPASS复合体的纯化以及电镜分析 | 第38-52页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 检测Set1/COMPASS的表达信号 | 第38-39页 |
| 3.3 Set1/COMPASS复合体的纯化 | 第39-44页 |
| 3.3.1 IgG亲和层析纯化Set1/COMPASS复合体 | 第40-42页 |
| 3.3.2 离子交换层析纯化Set1/COMPASS复合体 | 第42-44页 |
| 3.4 电镜研究纯化的Set1/COMPASS | 第44-49页 |
| 3.4.1 Set1/COMPASS的电镜结构的二维平均分析 | 第45-47页 |
| 3.4.2 Set1/COMPASS的三维结构分析 | 第47-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-52页 |
| 第四章 Set1/COMPASS的功能研究分析和探索 | 第52-58页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 体外条件下检测纯化的Set1/COMPASS复合体的甲基转移酶活性 | 第52-53页 |
| 4.3 Paf1C样品的制备以及Set1/Paf1与H3相互作用 | 第53-55页 |
| 4.3.1 Paf1C样品的制备 | 第54页 |
| 4.3.2 Dot-Blotting overlay assay检测Set1/Paf1与H3相互作用 | 第54-55页 |
| 4.4 Paf1C对Set1甲基化组蛋白H3K4位点的影响 | 第55-57页 |
| 4.4.1 体外条件下Paf1C对Set1甲基化组蛋白H3K4位点的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.2 体内条件下的Rtf1亚基缺失对组蛋白H3K4位点甲基化状态的影响 | 第56页 |
| 4.4.3 体外条件下Rtf1缺失的Paf1C对于对Set1甲基化组蛋白H3K4位点的影响 | 第56-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 Set1/COMPASS复合体亚基定位以及Set1/COMPASS与Octamer的组装 | 第58-66页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 复合体亚基的金标记定位 | 第58-62页 |
| 5.2.1 不同亚基带标签的Set1/COMPASS复合体的纯化 | 第59-60页 |
| 5.2.2 金标记数据的收集、处理与分析 | 第60-62页 |
| 5.3 Set1/COMPASS与Octamer的组装 | 第62-64页 |
| 5.3.1 直接孵育组装Set1/COMPASS与Octamer复合物 | 第62-63页 |
| 5.3.2 pulldown实验组装Set1/COMPASS与Octamer复合物 | 第63-64页 |
| 5.4 本章小结 | 第64-66页 |
| 第六章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 6.1 结论 | 第66页 |
| 6.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第76页 |
