| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 论文选题意义 | 第10页 |
| 研究目的及内容 | 第10-11页 |
| 1 文献综述肝脏干细胞组织工程研究进展及应用前景展望 | 第11-19页 |
| 1.1 肝脏干细胞 | 第11-13页 |
| 1.1.1 胚胎肝脏干细胞 | 第12页 |
| 1.1.2 成体肝脏干细胞 | 第12页 |
| 1.1.3 非肝源性干细胞 | 第12-13页 |
| 1.2 肝脏干细胞体外扩增的有效手段——三维培养 | 第13-18页 |
| 1.2.1 支架材料 | 第14-16页 |
| 1.2.2 生物反应器 | 第16-17页 |
| 1.2.3 肝脏干细胞移植体内定植的理想方式——肝脏干细胞可降解支架在生物反应器内形成的复合体 | 第17-18页 |
| 1.3 展望 | 第18-19页 |
| 2 脂肪间充质干细胞体外分离、提取及向肝样细胞诱导分化 | 第19-34页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第19-21页 |
| 2.2.1 新鲜的脂肪组织 | 第19页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-26页 |
| 2.3.1 人脂肪间充质干细胞原代培养 | 第21页 |
| 2.3.2 人脂肪间充质干细胞传代及扩增 | 第21页 |
| 2.3.3 人脂肪间充质干细胞生长曲线的检测 | 第21-22页 |
| 2.3.4 流式细胞仪检测人脂肪间充质干细胞的表型 | 第22页 |
| 2.3.5 人脂肪间充质干细胞向成骨细胞的诱导及鉴定 | 第22页 |
| 2.3.6 人脂肪间充质干细胞向脂肪细胞的诱导及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3.7 人脂肪干细胞向肝细胞的诱导 | 第23页 |
| 2.3.8 免疫荧光法检测AFP、ALB蛋白的表达 | 第23页 |
| 2.3.9 RT-PCR检测肝细胞特异性基因的表达 | 第23-25页 |
| 2.3.10 Elias检测诱导后细胞上清液尿素含量 | 第25-26页 |
| 2.4 结果 | 第26-32页 |
| 2.4.1 人脂肪间充质干细胞的形态观察 | 第26-27页 |
| 2.4.2 原代培养第3代人脂肪间充质干细胞的增殖情况 | 第27页 |
| 2.4.3 人脂肪间充质干细胞表型的检测 | 第27-28页 |
| 2.4.4 人脂肪间充质干细胞向成骨、成脂细胞的分化潜能 | 第28-29页 |
| 2.4.5 不同诱导时期细胞ALB、AFP蛋白的表达 | 第29-31页 |
| 2.4.6 不同诱导时期分化标志性基因的表达 | 第31页 |
| 2.4.7 不同诱导时期尿素含量的表达 | 第31-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 3 超顺磁性氧化铁对脂肪间充质干细胞标记的体外研究 | 第34-45页 |
| 3.1 前言 | 第34页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第34-36页 |
| 3.2.1 细胞 | 第34页 |
| 3.2.2 干细胞标记物 | 第34-35页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第35页 |
| 3.2.4 主要仪器 | 第35-36页 |
| 3.3 方法 | 第36-38页 |
| 3.3.1 脂肪间充质干细胞原代培养、扩增及鉴定 | 第36页 |
| 3.3.2 标记后细胞存活率及标记率的检测 | 第36页 |
| 3.3.3 MTT检测标记后细胞增殖活力 | 第36页 |
| 3.3.4 Annexin/碘化吡啶(PI)双染色法检测细胞凋亡 | 第36页 |
| 3.3.5 标记细胞流式细胞检测细胞表面CD分子 | 第36-37页 |
| 3.3.6 标记细胞成脂成骨分化 | 第37页 |
| 3.3.7 体外磁标细胞核磁共振影像 | 第37-38页 |
| 3.4 结果 | 第38-43页 |
| 3.4.1 SPIO标记人脂肪间充质干细胞形态学观察 | 第38页 |
| 3.4.2 不同浓度SPIO标记脂肪间充质干细胞 | 第38-39页 |
| 3.4.3 SPIO标记细胞MTT | 第39-40页 |
| 3.4.4 SPIO标记细胞凋亡检测 | 第40页 |
| 3.4.5 MIR检测标记情况 | 第40-41页 |
| 3.4.6 流式细胞仪鉴定细胞表面CD分子表达 | 第41-42页 |
| 3.4.7 标记后成脂成骨分化潜能 | 第42-43页 |
| 3.5 讨论 | 第43-44页 |
| 3.6 小结 | 第44-45页 |
| 4 Caveolin-1在脂肪间充质干细胞向肝脏诱导分化过程中的表达 | 第45-53页 |
| 4.1 前言 | 第45页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.1 细胞 | 第45页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第46页 |
| 4.3 方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 冻存细胞的复苏 | 第46-47页 |
| 4.3.2 人脂肪干细胞向肝细胞的诱导 | 第47页 |
| 4.3.3 免疫荧光法检测Cav-1、ER-α36蛋白的表达与定位 | 第47页 |
| 4.3.4 免疫印迹杂交检测不同诱导时期细胞相关蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 4.4 结果 | 第48-50页 |
| 4.4.1 不同诱导时期肝样细胞中Cav-1与ER-α36蛋白的表达 | 第48-50页 |
| 4.4.2 不同诱导时期肝样细胞p-MAPK、MAPK蛋白的表达 | 第50页 |
| 4.5 讨论 | 第50-52页 |
| 4.6 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录A 中英文对照及缩略语 | 第60-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
