| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 猪等孢球虫概述 | 第12-13页 |
| 1.1 猪等孢球虫的分类及生物学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.1 猪等孢球虫的分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 猪等孢球虫的形态特征 | 第13页 |
| 1.1.3 猪等孢球虫的生活史 | 第13页 |
| 2 球虫卵囊的分离方法 | 第13-16页 |
| 2.1 粪便中分离球虫卵囊的主要方法 | 第13-14页 |
| 2.1.1 饱和盐水漂浮法 | 第13-14页 |
| 2.1.2 Sheather's蔗糖溶液漂浮法 | 第14页 |
| 2.2 组织中分离球虫卵囊的主要方法 | 第14-15页 |
| 2.2.1 饱和硫酸镁溶液漂浮法 | 第14页 |
| 2.2.2 改良韦氏法(浓硫酸-重铬酸钠卵囊洗液处理法) | 第14-15页 |
| 2.3 单卵囊分离的主要方法 | 第15-16页 |
| 2.3.1 玻璃毛细吸管分离法 | 第15页 |
| 2.3.2 琼脂分离法 | 第15-16页 |
| 2.3.3 玻璃纸分离法 | 第16页 |
| 3 猪球虫的分子生物学诊断方法 | 第16-24页 |
| 3.1 酶联免疫吸附检测法(ELISA检测法) | 第16-17页 |
| 3.2 自体荧光显微镜检测技术 | 第17-18页 |
| 3.3 PCR技术 | 第18-19页 |
| 3.3.1 普通PCR | 第18页 |
| 3.3.2 巢式PCR(Nested PCR) | 第18-19页 |
| 3.3.3 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP) | 第19页 |
| 3.4 LAMP技术 | 第19-23页 |
| 3.4.1 LAMP技术的原理 | 第19-21页 |
| 3.4.2 LAMP扩增产物的检测方法 | 第21页 |
| 3.4.3 LAMP技术与PCR技术的比较 | 第21-22页 |
| 3.4.4 LAMP检测方法在寄生虫学上的应用及展望 | 第22-23页 |
| 3.5 本试验的研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 福建省部分猪场猪等孢球虫感染情况的调查与分析 | 第24-33页 |
| 1 材料与方法 | 第24-25页 |
| 1.1 样品的采集 | 第24页 |
| 1.2 卵囊检查及鉴定 | 第24页 |
| 1.3 OPG值测定 | 第24-25页 |
| 1.4 统计方法 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.1 总体检测情况 | 第25页 |
| 2.2 不同猪场仔猪等孢球虫的感染情况 | 第25-26页 |
| 2.3 仔猪等孢球虫卵囊阳性率与感染强度的关系 | 第26-27页 |
| 2.4 猪场规模对仔猪等孢球虫感染的影响 | 第27页 |
| 2.5 仔猪等孢球虫感染的地区差异 | 第27-28页 |
| 2.6 仔猪等孢球虫感染的周龄差异 | 第28页 |
| 2.7 不同饲养地面对猪感染等孢球虫的影响 | 第28-29页 |
| 2.8 抗球虫药物对仔猪感染等孢球虫的影响 | 第29-30页 |
| 2.8.1 不同猪场间的比较 | 第29页 |
| 2.8.2 不同周龄仔猪的比较 | 第29-30页 |
| 3 小结与讨论 | 第30-33页 |
| 第三章 猪等孢球虫的PCR诊断方法 | 第33-44页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 1.1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1.1 虫株与菌株 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 1.2 方法 | 第34-37页 |
| 1.2.1 卵囊的收集与纯化 | 第34页 |
| 1.2.2 卵囊DNA提取 | 第34-35页 |
| 1.2.3 目的基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 1.2.4 目的基因的克隆 | 第36-37页 |
| 1.2.5 敏感性试验 | 第37页 |
| 1.2.6 特异性试验 | 第37页 |
| 1.2.7 临床中特定个数卵囊的PCR检测 | 第37页 |
| 2 结果及分析 | 第37-42页 |
| 2.1 PCR反应温度的优化 | 第37-38页 |
| 2.2 PCR反应模板DNA量的优化 | 第38页 |
| 2.3 PCR反应引物浓度的优化 | 第38-39页 |
| 2.4 重组质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
| 2.5 重组质粒测序结果 | 第39-40页 |
| 2.6 PCR特异性试验 | 第40-41页 |
| 2.7 PCR敏感性试验 | 第41页 |
| 2.8 临床中特定个数卵囊PCR的检测结果 | 第41-42页 |
| 3 小结与讨论 | 第42-44页 |
| 3.1 猪等孢球虫卵囊DNA提取方法的优化 | 第42页 |
| 3.2 PCR反应体系的优化 | 第42页 |
| 3.3 质粒及卵囊检测阀值的确定 | 第42-44页 |
| 第四章 猪等孢球虫LAMP检测方法的建立 | 第44-56页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 虫株与菌株 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 1.2 方法 | 第45-49页 |
| 1.2.1 猪等孢球虫卵囊的收集与纯化 | 第45页 |
| 1.2.2 猪等孢球虫卵囊DNA的提取 | 第45页 |
| 1.2.3 目的基因的LAMP扩增 | 第45-48页 |
| 1.2.4 特异性试验 | 第48页 |
| 1.2.5 敏感性试验 | 第48页 |
| 1.2.6 临床中特定个数卵囊的LAMP检测 | 第48-49页 |
| 2 结果及分析 | 第49-54页 |
| 2.1 LAMP反应Bst DNA聚合酶浓度的优化结果 | 第49页 |
| 2.2 LAMP反应Mg~(2+)浓度的优化结果 | 第49-50页 |
| 2.3 LAMP反应dNTPs浓度的优化结果 | 第50页 |
| 2.4 LAMP反应甜菜碱浓度的优化结果 | 第50-51页 |
| 2.5 LAMP反应内引物的优化结果 | 第51-52页 |
| 2.6 LAMP特异性试验 | 第52-53页 |
| 2.7 LAMP敏感性试验 | 第53页 |
| 2.8 临床中特定个数卵囊DNA的LAMP检测 | 第53-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 3.1 猪等孢球虫LAMP检测方法的建立及优化 | 第54页 |
| 3.2 LAMP技术与PCR技术敏感性的比较 | 第54-55页 |
| 3.3 LAMP技术污染的控制 | 第55-56页 |
| 本论文结论与创新点 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附表1 | 第65-67页 |
| 附图1 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第68页 |
