| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第1章 CBP bromodomain识别组蛋白乙酰化修饰H3K56ac的研究背景 | 第12-28页 |
| 1.1 引言 | 第12-14页 |
| 1.2 核小体结构 | 第14-15页 |
| 1.3 表观遗传调控 | 第15-16页 |
| 1.4 组蛋白翻译后修饰 | 第16-24页 |
| 1.4.1 组蛋白乙酰化翻译后修饰 | 第17-20页 |
| 1.4.2 组蛋白去乙酰化修饰 | 第20-21页 |
| 1.4.3 组蛋白乙酰化修饰的识别 | 第21-24页 |
| 1.5 CBP蛋白的结构与功能 | 第24-25页 |
| 1.6 H3K56ac的重要作用 | 第25-26页 |
| 1.7 CBP bromodomain与H3K56ac的相互作用 | 第26-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-55页 |
| 2.1 蛋白相关信息调研及获取 | 第28页 |
| 2.2 目的基因的克隆 | 第28-36页 |
| 2.2.1 蛋白质边界选择 | 第28页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第28-29页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.4 PCR产物回收 | 第30-31页 |
| 2.2.5 目的基因片段双酶切实验 | 第31-32页 |
| 2.2.6 载体准备 | 第32-33页 |
| 2.2.7 酶切后的片段与载体连接 | 第33页 |
| 2.2.8 连接产物转化入感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.9 单克隆鉴定及测序 | 第34-35页 |
| 2.2.10 构建定点突变体 | 第35-36页 |
| 2.3 目的蛋白结构域的表达与纯化 | 第36-44页 |
| 2.3.1 初步少量试表达 | 第36-38页 |
| 2.3.2 表达目的蛋白 | 第38页 |
| 2.3.3 His6-Tag融合蛋白纯化策略 | 第38-40页 |
| 2.3.4 GST标签融合蛋白纯化策略 | 第40-41页 |
| 2.3.5 分子筛纯化目的蛋白 | 第41-42页 |
| 2.3.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.3.7 蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| 2.3.8 多肽样品处理 | 第44页 |
| 2.4 晶体生长、数据收集及结构解析 | 第44-46页 |
| 2.4.1 晶体生长 | 第44-45页 |
| 2.4.2 晶体数据收集 | 第45页 |
| 2.4.3 晶体数据处理及结构的修正 | 第45-46页 |
| 2.5 组蛋白表达及体外核小体的组装 | 第46-50页 |
| 2.5.1 组蛋白表达及纯化 | 第46页 |
| 2.5.2 HPLC精细纯化组蛋白 | 第46-47页 |
| 2.5.3 核小体体外重组 | 第47-48页 |
| 2.5.4 非天然氨基酸方法重组乙酰化组蛋白 | 第48-50页 |
| 2.5.5 Native电泳 | 第50页 |
| 2.6 核磁相关实验 | 第50-51页 |
| 2.6.1 核磁样品准备 | 第50页 |
| 2.6.2 NMR化学位移扰动实验 | 第50-51页 |
| 2.7 相互作用实验 | 第51-55页 |
| 2.7.1 GST pull-down | 第51-52页 |
| 2.7.2 Western blot实验 | 第52-53页 |
| 2.7.3 核小体免疫共沉淀 | 第53-54页 |
| 2.7.4 等温滴定量热(ITC) | 第54-55页 |
| 第3章 人源CBP bromodomain与组蛋白H3K56ac的结构及功能研究 | 第55-79页 |
| 3.1 实验结果 | 第55-75页 |
| 3.1.1 CBP bromo结构域的克隆与表达 | 第55-57页 |
| 3.1.2 CBP-BD与小牛胸腺组蛋白相互作用 | 第57-58页 |
| 3.1.3 CBP-BD与H3K56ac(44-57)肽段的选择性验证 | 第58-61页 |
| 3.1.4 CBP bromodomain与H3 K56ac( 44-57)肽段的复合物晶体生长、数据收集及结构解析 | 第61-63页 |
| 3.1.5 CBP bromodomain与H3K56ac( 44-57)复合物晶体结构的分析 | 第63-70页 |
| 3.1.6 体外重组H3K56ac的组蛋白与CBP bromodomain的相互作用 | 第70-75页 |
| 3.2 实验结论 | 第75页 |
| 3.3 实验讨论 | 第75-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 研究生期间待发表的学术论文及参加的学术会议 | 第86页 |
