| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1 淀粉 | 第10页 |
| 1.2 生物乙醇 | 第10-12页 |
| 1.2.1 生物乙醇的重要性 | 第10-11页 |
| 1.2.2 生物乙醇生产的发展 | 第11-12页 |
| 1.3 淀粉酶 | 第12-16页 |
| 1.3.1 淀粉酶分类 | 第13页 |
| 1.3.2 耐高温α-淀粉酶 | 第13-16页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 1.5 本研究技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-37页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.1 质粒与菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂及仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第19-37页 |
| 2.2.1 菌种活化及淀粉透明圈筛选 | 第19页 |
| 2.2.2 菌株芽孢染色 | 第19页 |
| 2.2.3 菌种16SrDNA相关鉴定 | 第19-22页 |
| 2.2.4 地衣芽孢杆菌发酵培养及耐高温α-淀粉酶酶活相关检测 | 第22-24页 |
| 2.2.5 地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶相关研究 | 第24-25页 |
| 2.2.6 原核表达载体、真核表达载体、植物GFP融合表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.7 耐高温α-淀粉酶在原核微生物中的表达 | 第28-30页 |
| 2.2.8 耐高温α-淀粉酶在真核微生物中的表达 | 第30页 |
| 2.2.9 耐高温α-淀粉酶在烟草中瞬时表达 | 第30-32页 |
| 2.2.10 耐高温α-淀粉酶在拟南芥中的表达 | 第32-35页 |
| 2.2.11 耐高温α-淀粉酶在马铃薯中的表达 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-56页 |
| 3.1 菌株淀粉平板透明圈筛选 | 第37页 |
| 3.2 芽孢染色 | 第37-38页 |
| 3.3 16SrDNA的PCR扩增 | 第38页 |
| 3.4 菌株16SrDNA鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5 地衣芽孢杆菌发酵产物淀粉液化工艺 | 第39-40页 |
| 3.6 耐高温α-淀粉酶酶活检测及耐高温稳定性鉴定 | 第40-41页 |
| 3.7 耐高温α-淀粉酶全长扩增 | 第41-43页 |
| 3.8 耐高温α-淀粉酶蛋白结构分析 | 第43-44页 |
| 3.9 原核表达载体pET-22b-α、真核表达载体pPIC9K-α及植物GFP表达载体G1300-α的鉴定 | 第44页 |
| 3.10 原核表达菌株在含淀粉培养基中透明圈鉴定 | 第44-45页 |
| 3.11 耐高温α-淀粉酶在重组大肠杆菌中的表达 | 第45-46页 |
| 3.12 真核表达菌株在含淀粉培养基中透明圈鉴定 | 第46-47页 |
| 3.13 烟草瞬时表达 | 第47页 |
| 3.14 I_2-KI溶液对瞬时表达烟草叶片染色 | 第47-49页 |
| 3.15 重组载体拟南芥转化 | 第49页 |
| 3.16 拟南芥转化植株的PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.17 转基因拟南芥叶片中耐高温α-淀粉酶酶活染色检测 | 第50页 |
| 3.18 HPLC检测转基因拟南芥叶片中淀粉酶酶活 | 第50-52页 |
| 3.19 转基因拟南芥表型观察 | 第52页 |
| 3.20 马铃薯试管薯的诱导 | 第52-53页 |
| 3.21 马铃薯试管薯农杆菌侵染转化 | 第53-54页 |
| 3.22 转基因马铃薯植株PCR鉴定 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 耐高温α-淀粉酶在微生物中表达 | 第56页 |
| 4.2 耐高温α-淀粉酶在烟草中瞬时表达 | 第56-57页 |
| 4.3 耐高温α-淀粉酶转基因拟南芥 | 第57页 |
| 4.4 耐高温α-淀粉酶转基因马铃薯 | 第57-58页 |
| 4.5 耐高温α-淀粉酶转基因植物的意义 | 第58-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
