| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-26页 |
| 一、产肠毒素大肠杆菌的研究进展 | 第12-14页 |
| 1 ETEC的致病机理 | 第12-13页 |
| 2 ETEC的预防机制 | 第13-14页 |
| 二、F4菌毛研究进展 | 第14-19页 |
| 1 细菌黏附素 | 第14-15页 |
| 2 F4菌毛的一般特性 | 第15页 |
| 3 F4菌毛操纵子的结构和功能 | 第15-16页 |
| 4 F4菌毛受体的研究进展 | 第16-19页 |
| 参考文献 | 第19-26页 |
| 实验部分 | 第26-59页 |
| 研究一: FaeG亚单位在F4~+ ETEC感染中的作用 | 第26-41页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 样品、细胞和菌株 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第27页 |
| 1.4 实验动物 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| 2.1 细菌感染实验 | 第28页 |
| 2.2 Western blot实验 | 第28-29页 |
| 2.3 仔猪感染实验 | 第29-32页 |
| 2.3.1 筛选阳性仔猪 | 第29-30页 |
| 2.3.1.1 样品采集 | 第29页 |
| 2.3.1.2 PCR扩增MUC4目的基因片段 | 第29-30页 |
| 2.3.1.3 酶切鉴定PCR产物 | 第30页 |
| 2.3.2 实验动物分组及处理 | 第30-31页 |
| 2.3.3 样品的采集与保存 | 第31页 |
| 2.3.4 石蜡切片制备 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-39页 |
| 3.1 Western blot实验结果 | 第32-34页 |
| 3.2 仔猪感染试验结果 | 第34-39页 |
| 3.2.1 筛选阳性仔猪 | 第34页 |
| 3.2.2 酶切鉴定结果 | 第34-35页 |
| 3.2.3 实验仔猪体温、体重及临床症状 | 第35-36页 |
| 3.2.4 肠道切片HE染色结果 | 第36-38页 |
| 3.2.5 肠道切片美兰染色结果 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39页 |
| 参考文献 | 第39-41页 |
| 研究二: 三种变体的FaeG蛋白与受体APN的结合能力探究 | 第41-59页 |
| 1 材料 | 第42页 |
| 1.1 样品、细胞和菌株 | 第42页 |
| 1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-47页 |
| 2.1 FaeG与候选受体APN的功能结合域相关研究 | 第42-44页 |
| 2.1.1 合成多肽 | 第42-43页 |
| 2.1.2 ELISA验证合成多肽 | 第43页 |
| 2.1.3 IPEC-J2细胞与多肽结合试验 | 第43-44页 |
| 2.1.3.1 制备细胞爬片 | 第43-44页 |
| 2.1.3.2 激光共聚焦分析FaeG蛋白多肽与细胞的结合 | 第44页 |
| 2.2 多肽定点突变 | 第44-45页 |
| 2.2.1 筛选关键作用位点 | 第44页 |
| 2.2.2 突变多肽ELISA验证 | 第44页 |
| 2.2.3 IPEC-J2细胞与突变多肽结合试验 | 第44-45页 |
| 2.3 氨基酸定点突变 | 第45-47页 |
| 2.3.1 设计突变引物 | 第45页 |
| 2.3.2 PCR扩增获得目的片段 | 第45页 |
| 2.3.3 DMT酶消化甲基化质粒模板 | 第45-46页 |
| 2.3.4 转化及阳性克隆的筛选 | 第46页 |
| 2.3.5 Pull-Down实验 | 第46-47页 |
| 2.3.6 Western blot实验 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-55页 |
| 3.1 ELISA检测合成多肽 | 第47-48页 |
| 3.2 激光共聚焦分析FaeG蛋白多肽与细胞的结合结果 | 第48-50页 |
| 3.3 确定关键作用位点 | 第50-51页 |
| 3.4 ELISA验证合成突变多肽 | 第51-52页 |
| 3.5 突变多肽与IPEC-J2细胞共孵育结果 | 第52-53页 |
| 3.6 突变表达载体构建结果 | 第53-55页 |
| 3.7 pull-down验证APN与FaeG蛋白互作结果 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第61-62页 |
