| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 酿酒酵母概要 | 第11页 |
| 1.2 酿酒酵母乙醇发酵 | 第11-14页 |
| 1.2.1 影响酿酒酵母乙醇发酵的相关生理因素 | 第12-13页 |
| 1.2.2 国外工业化酵母发酵特点 | 第13-14页 |
| 1.3 酿酒酵母细胞周期 | 第14-17页 |
| 1.3.1 酿酒酵母的有丝分裂 | 第14页 |
| 1.3.2 酿酒酵母的减数分裂 | 第14-15页 |
| 1.3.3 细胞周期调控因子 | 第15-16页 |
| 1.3.4 G1/S期周期调控因子MBF研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题研究 | 第17-20页 |
| 1.4.1 课题研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 1.4.2 实验流程 | 第19-20页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 主要培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 菌种和质粒 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-40页 |
| 2.2.1 酿酒酵母MBP1敲除及生理特性研究方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1.1 酿酒酵母基因组的提取 | 第22页 |
| 2.2.1.2 MBP1基因完整性验证 | 第22-23页 |
| 2.2.1.3 单倍体制备 | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 构建敲除组件 | 第24-25页 |
| 2.2.1.5 敲除组件的转化 | 第25-26页 |
| 2.2.1.6 转化子的筛选及验证 | 第26-27页 |
| 2.2.1.7 MATα型和MATα型杂交复倍 | 第27-28页 |
| 2.2.1.8 KanMX抗性标记的去除 | 第28页 |
| 2.2.1.9 生长曲线的测定 | 第28页 |
| 2.2.1.10 发酵实验 | 第28-29页 |
| 2.2.1.11 酒精含量测定 | 第29页 |
| 2.2.1.12 糖分的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.1.13 细胞体积检测 | 第30页 |
| 2.2.1.14 出芽率检测 | 第30页 |
| 2.2.1.15 酵母假菌丝检测 | 第30页 |
| 2.2.1.16 细胞壁生理检测 | 第30-31页 |
| 2.2.1.17 乙醇耐受性测试 | 第31页 |
| 2.2.1.18 海藻糖含量的测量 | 第31页 |
| 2.2.1.19 细胞膜通透性的检测 | 第31页 |
| 2.2.1.20 呼吸强度测定 | 第31-32页 |
| 2.2.1.21 氧含量对发酵产乙醇影响的测定 | 第32页 |
| 2.2.1.22 蛋白质标准曲线的测定 | 第32页 |
| 2.2.1.23 细胞酶液的提取 | 第32页 |
| 2.2.1.24 过氧化氢酶酶活性测定 | 第32-33页 |
| 2.2.1.25 总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性测定 | 第33页 |
| 2.2.1.26 乙醇脱氢酶活性测定 | 第33页 |
| 2.2.2 MBP1过表达菌株的构建 | 第33-40页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌DH5α感受态制备 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 DH5α化 | 第34页 |
| 2.2.2.3 质粒pYES2改造 | 第34-36页 |
| 2.2.2.4 MBP1表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.2.5 酵母MBP1过表达菌株构建 | 第37页 |
| 2.2.2.6 生长曲线测定 | 第37-38页 |
| 2.2.2.7 细胞形态观察 | 第38页 |
| 2.2.2.8 MBP1基因相对表达水平测定 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第40-58页 |
| 3.1 酿酒酵母MBP1敲除及生理特性研究结果分析 | 第40-52页 |
| 3.1.1 MBP1完整性验证结果 | 第40页 |
| 3.1.2 单倍体细胞的筛选结果 | 第40-41页 |
| 3.1.3 转化子PCR验证 | 第41-42页 |
| 3.1.4 单倍体交配实验 | 第42-43页 |
| 3.1.5 KanMX抗性标记的去除 | 第43页 |
| 3.1.6 生长曲线 | 第43-44页 |
| 3.1.7 发酵产乙醇结果 | 第44页 |
| 3.1.8 可发酵性总糖的检测结果 | 第44-45页 |
| 3.1.9 细胞形态特征 | 第45-46页 |
| 3.1.10 细胞体积的检测结果 | 第46页 |
| 3.1.11 出芽率的检测结果 | 第46页 |
| 3.1.12 酵母假菌丝形成 | 第46-47页 |
| 3.1.13 细胞壁生理检测结果 | 第47-48页 |
| 3.1.14 乙醇耐受性结果 | 第48页 |
| 3.1.15 海藻糖含量测定结果 | 第48-49页 |
| 3.1.16 细胞膜通透性检测结果 | 第49-50页 |
| 3.1.17 呼吸强度以及对酵母乙醇发酵的影响 | 第50页 |
| 3.1.18 与耐受性相关酶活的检测结果 | 第50-52页 |
| 3.1.18.1 过氧化氢酶(CAT)酶活性测定结果 | 第50-51页 |
| 3.1.18.2 超氧化物歧化酶(SOD)酶活性测定结果 | 第51页 |
| 3.1.18.3 乙醇脱氢酶(ADH)酶活性测定结果 | 第51-52页 |
| 3.2 MBP1过表达菌株的构建结果及分析 | 第52-58页 |
| 3.2.1 pYES2质粒改造结果 | 第52-53页 |
| 3.2.2 pYES2/KanMXIMBP1表达载体构建结果 | 第53-54页 |
| 3.2.3 酿酒酵母pK,pKY转化菌株的筛选结果 | 第54页 |
| 3.2.4 生长曲线测定结果 | 第54-55页 |
| 3.2.5 细胞形态观察结果 | 第55-56页 |
| 3.2.6 MBP1相对表达量分析 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 MBP1生理功能研究分析 | 第58-59页 |
| 4.2 酿酒酵母基因敲除分析 | 第59页 |
| 4.3 酿酒酵母单倍体和二倍体细胞的筛选分析 | 第59-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 结论 | 第60页 |
| 5.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 1.1 标准曲线的制作 | 第70-72页 |
| 1.1.1 葡萄糖标准曲线制作 | 第70-71页 |
| 1.1.2 蛋白质标准曲线的制作 | 第71-72页 |
| 1.1.3 测量海藻糖标准曲线 | 第72页 |
| 1.2 主要仪器 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
