| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 关键词及缩写 | 第8-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-34页 |
| 1.1 阿尔茨海默症简介 | 第14-20页 |
| 1.1.1 阿尔茨海默症的发展与现状 | 第14-15页 |
| 1.1.2 阿尔茨海默症的临床表现、病理特征及发病机制 | 第15-17页 |
| 1.1.3 Aβ淀粉样蛋白级联假说 | 第17-20页 |
| 1.2 阿尔茨海默症治疗现状 | 第20-24页 |
| 1.2.1 阿尔茨海默症治疗策略及分类 | 第20-22页 |
| 1.2.2 以Aβ为靶点的阿尔茨海默症疗法 | 第22-24页 |
| 1.3 Aβ 免疫疗法 | 第24-28页 |
| 1.3.1 Aβ被动免疫疗法 | 第25-26页 |
| 1.3.2 Aβ主动免疫疗法 | 第26-28页 |
| 1.4 诺如病毒疫苗载体系统简介 | 第28-32页 |
| 1.4.1 诺如病毒简介 | 第28-29页 |
| 1.4.2 诺如病毒P颗粒简介 | 第29-31页 |
| 1.4.3 基于诺如病毒P颗粒为载体的疫苗研究现状 | 第31-32页 |
| 1.5 研究意义与实验设计 | 第32-34页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第32-33页 |
| 1.5.2 实验思路和设计 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-41页 |
| 2.1.1 菌株，细胞株，质粒，动物 | 第34页 |
| 2.1.2 抗体 | 第34-35页 |
| 2.1.3 多肽合成 | 第35页 |
| 2.1.4 基因合成 | 第35-37页 |
| 2.1.5 引物合成 | 第37-38页 |
| 2.1.6 主要试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.7 主要溶液 | 第39-40页 |
| 2.1.8 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-56页 |
| 2.2.1 质粒的构建 | 第41-45页 |
| 2.2.1.1 pET28a-P protein质粒的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.1.2 pET28a-P protein-Kpn I & Eag I突变载体构建 | 第42-43页 |
| 2.2.1.3 表达重组P颗粒蛋白质粒的构建 | 第43-44页 |
| 2.2.1.4 重组P颗粒蛋白结构模拟 | 第44-45页 |
| 2.2.2 蛋白表达纯化及性质鉴定 | 第45-47页 |
| 2.2.2.1 重组P颗粒蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第45页 |
| 2.2.2.2 重组P颗粒蛋白的镍离子金属螯合亲和纯化 | 第45页 |
| 2.2.2.3 重组P颗粒蛋白的凝胶过滤层析纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.2.4 粒径分析（DSL）检测重组P颗粒蛋白颗粒大小 | 第46页 |
| 2.2.2.5 电镜（TEM）观察五种重组P颗粒蛋白形态 | 第46页 |
| 2.2.2.6 SDS-PAGE、Native-PAGE以及Western blot | 第46-47页 |
| 2.2.2.7 高效液相（HPLC）法检测重组P颗粒蛋白多聚体形式 | 第47页 |
| 2.2.3 小鼠免疫及免疫效果评价 | 第47-49页 |
| 2.2.3.1 小鼠免疫基本操作流程 | 第47页 |
| 2.2.3.2 免疫诱导产生Aβ42 特异性抗体浓度的ELISA检测 | 第47-48页 |
| 2.2.3.3 ELISPOT检测T细胞免疫反应 | 第48-49页 |
| 2.2.3.4 抗体分型检测 | 第49页 |
| 2.2.4 小鼠行为学检测 | 第49-51页 |
| 2.2.4.1 Morris水迷宫检测小鼠认知障碍 | 第49-50页 |
| 2.2.4.2 筑巢实验检测小鼠海马区功能损伤 | 第50-51页 |
| 2.2.5 小鼠脑及其他组织切片制作及免疫组化染色 | 第51-53页 |
| 2.2.5.1 小鼠脑及其他组织切片的制备 | 第51页 |
| 2.2.5.2 HE染色 | 第51-52页 |
| 2.2.5.3 免疫组化染色 | 第52-53页 |
| 2.2.5.4 Aβ 斑块数以及斑块面积统计 | 第53页 |
| 2.2.6 小鼠体内Aβ 以及炎症因子含量检测 | 第53-54页 |
| 2.2.6.1 小鼠脑匀浆样品的制备 | 第53页 |
| 2.2.6.2 Aβ40、Aβ42 含量的ELISA检测 | 第53-54页 |
| 2.2.6.3 炎症因子含量的ELISA检测 | 第54页 |
| 2.2.7 抗体体外功能检测 | 第54-55页 |
| 2.2.7.1 细胞培养基本操作 | 第54页 |
| 2.2.7.2 免疫诱导产生Aβ42 特异性抗体的纯化 | 第54页 |
| 2.2.7.3 Aβ 寡聚体的制备 | 第54-55页 |
| 2.2.7.4 Aβ 寡聚体细胞毒性与抑制实验（MTT） | 第55页 |
| 2.2.7.5 Aβ 纤维形成以及抑制实验 | 第55页 |
| 2.2.8. 统计学处理方法 | 第55-56页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第56-112页 |
| 3.1 五种候选重组P颗粒蛋白疫苗的构建与表达纯化 | 第56-65页 |
| 3.1.1 五种候选重组P颗粒蛋白疫苗的设计 | 第57-58页 |
| 3.1.2 候选重组P颗粒蛋白疫苗的结构模拟 | 第58-59页 |
| 3.1.3 表达五种候选重组P颗粒蛋白的质粒构建 | 第59-62页 |
| 3.1.3.1 pET28a-PP突变载体构建 | 第59-60页 |
| 3.1.3.2 表达五种重组P颗粒蛋白的质粒构建 | 第60-62页 |
| 3.1.4 五种候选重组P颗粒蛋白的表达纯化 | 第62-65页 |
| 3.1.4.1 Ni-NTA层析纯化 | 第62-64页 |
| 3.1.4.2 凝胶过滤层析 | 第64-65页 |
| 3.1.5 小结 | 第65页 |
| 3.2 五种候选重组P颗粒蛋白疫苗的理化性质分析 | 第65-70页 |
| 3.2.1 SDS-PAGE检测五种重组P颗粒蛋白分子量大小 | 第65-66页 |
| 3.2.2 粒径分析（DLS）检测五种重组P颗粒蛋白颗粒大小 | 第66-68页 |
| 3.2.3 电镜（TEM）观察五种重组P颗粒蛋白形态 | 第68页 |
| 3.2.4 五种重组P颗粒蛋白多聚体形式分析 | 第68-70页 |
| 3.2.4.1 Native-PAGE | 第69页 |
| 3.2.4.2 高效液相（HPLC）分析 | 第69-70页 |
| 3.2.5 小结 | 第70页 |
| 3.3 最优重组P颗粒蛋白疫苗的筛选以及优选疫苗免疫形式的确定 | 第70-77页 |
| 3.3.1 最优重组P颗粒蛋白疫苗的筛选 | 第71-73页 |
| 3.3.1.1 野生小鼠中免疫实验设计 | 第71页 |
| 3.3.1.2 五种蛋白疫苗在野生小鼠中免疫原性对比 | 第71-73页 |
| 3.3.2 优选重组P颗粒蛋白疫苗免疫形式的确定 | 第73-77页 |
| 3.3.2.1 野生小鼠中免疫实验设计 | 第73-74页 |
| 3.3.2.2 优选重组P颗粒蛋白疫苗免疫计量摸索 | 第74-75页 |
| 3.3.2.3 优选重组P颗粒蛋白疫苗T细胞免疫反应检测 | 第75-77页 |
| 3.3.3 小结 | 第77页 |
| 3.4 APP/PS1双转基因AD模型小鼠病程研究 | 第77-82页 |
| 3.4.1 病程研究实验设计 | 第77-78页 |
| 3.4.2 不同年龄段AD模型鼠认知障碍检测 | 第78-79页 |
| 3.4.3 不同年龄段AD模型鼠脑中Aβ 沉积斑块的检测 | 第79-82页 |
| 3.4.4 小结 | 第82页 |
| 3.5 优选蛋白疫苗对不同病程AD模型小鼠作用效果研究 | 第82-98页 |
| 3.5.1 不同病程AD模型小鼠免疫实验设计 | 第83-84页 |
| 3.5.2 优选蛋白疫苗对发病前AD模型鼠作用效果研究 | 第84-88页 |
| 3.5.2.1 优选疫苗在发病前AD模型鼠中免疫原性检测 | 第84-85页 |
| 3.5.2.2 优选疫苗对发病前AD模型鼠治疗效果检测 | 第85-88页 |
| 3.5.3 优选蛋白疫苗对轻度AD模型鼠作用效果研究 | 第88-92页 |
| 3.5.3.1 优选疫苗在轻度AD模型鼠中免疫原性检测 | 第88-89页 |
| 3.5.3.2 优选疫苗对轻度AD模型鼠治疗效果检测 | 第89-92页 |
| 3.5.4 优选蛋白疫苗对中度AD模型鼠作用效果研究 | 第92-95页 |
| 3.5.4.1 优选疫苗在中度AD模型鼠中免疫原性检测 | 第92-93页 |
| 3.5.4.2 优选疫苗对中度AD模型鼠治疗效果检测 | 第93-95页 |
| 3.5.5 优选蛋白疫苗对不同病程AD模型鼠作用效果对比 | 第95-98页 |
| 3.5.5.1 优选疫苗在不同病程AD模型鼠中免疫原性比较 | 第96-97页 |
| 3.5.5.2 优选疫苗对不同病程AD模型鼠治疗效果比较 | 第97-98页 |
| 3.5.6 小结 | 第98页 |
| 3.6 优选蛋白疫苗安全性评价 | 第98-102页 |
| 3.6.1 优选蛋白疫苗引起T细胞免疫反应检测 | 第99-100页 |
| 3.6.1.1 ELISPOT检测T细胞免疫反应 | 第99页 |
| 3.6.1.2 抗体分型检测免疫诱导产生抗体形式 | 第99-100页 |
| 3.6.2 治疗后小鼠脑中炎症因子检测 | 第100-101页 |
| 3.6.3 治疗后小鼠脑各器官切片检测 | 第101-102页 |
| 3.6.4 小结 | 第102页 |
| 3.7 疫苗的作用机制研究 | 第102-108页 |
| 3.7.1 免疫诱导产生抗体的体外功能实验 | 第103-105页 |
| 3.7.1.1 免疫诱导产生抗体能够识别多种形式Aβ | 第103-104页 |
| 3.7.1.2 免疫诱导产生抗体抑制Aβ 寡聚体的细胞毒性 | 第104-105页 |
| 3.7.1.3 免疫诱导产生抗体抑制Aβ 纤维的形成与聚集 | 第105页 |
| 3.7.2 免疫能够重建AD模型小鼠体内Aβ 稳态平衡 | 第105-108页 |
| 3.7.2.1 治疗后AD小鼠脑中Aβ 含量变化 | 第106页 |
| 3.7.2.2 治疗后AD小鼠血液中Aβ 含量变化 | 第106-108页 |
| 3.7.3 小结 | 第108页 |
| 3.8 讨论 | 第108-112页 |
| 结论 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 作者攻读博士学位期间发表论文 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
