| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 IGFS家族简介 | 第12页 |
| 1.2 IGF2基因的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 IGF2基因的结构 | 第12页 |
| 1.2.2 IGF2基因的功能 | 第12-13页 |
| 1.2.3 IGF2基因信号通路 | 第13-15页 |
| 1.3 启动子的结构与功能概述 | 第15页 |
| 1.4 组织特异性启动子概况 | 第15-17页 |
| 1.4.1 组织特异性启动子研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4.2 肌肉特异性启动子CMV-MyoGpro概况 | 第16页 |
| 1.4.3 肌肉特异性启动子MyoGpro-double概况 | 第16-17页 |
| 1.4.4 肌肉特异性启动子Desminpro概况 | 第17页 |
| 1.5 研究的目的及意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及细胞 | 第19页 |
| 2.1.2 工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 细胞的培养 | 第21-23页 |
| 2.2.2 牛IGF2基因的克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.3 肌肉特异性启动子IGF2表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组质粒瞬时转染牛骨骼肌卫星细胞和牛胎儿成纤维细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.5 EDU检测重组质粒对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第28-29页 |
| 2.2.6 RT-PCR检测三种重组质粒转染细胞后相关基因的表达变化 | 第29-31页 |
| 2.2.7 Western Blot检测转染后相关基因蛋白的表达变化 | 第31-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 肌肉特异性启动子IGF2表达载体构建 | 第34-40页 |
| 3.1.1 牛IGF2基因CDS区的克隆与测序 | 第34-36页 |
| 3.1.2 中间载体pcDNA3.1(+)-IGF2酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.3 肌肉特异性IGF2表达载体的构建及双酶切鉴定 | 第37-40页 |
| 3.2 表达载体活性与特异性的筛选 | 第40-41页 |
| 3.2.1 RT-PCR检测三种重组质粒转染细胞后IGF2的表达变化 | 第40-41页 |
| 3.3 真核表达载体pGL3-desminpro-IGF2对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第41-45页 |
| 3.3.1 EdU检测转染pGL3-desminpro-IGF2后对细胞增殖的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.2 RT-PCR检测转染pGL3-desminpro-IGF2后细胞周期相关基因的表达变化 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Western Blot检测下游基因AKT和P-AKT蛋白的表达 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 4.1 载体的选择 | 第45页 |
| 4.2 组织特异性启动子功能的研究 | 第45-46页 |
| 4.3 转染方法及条件的选择 | 第46-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第55页 |
