| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 1 引言 | 第11-23页 |
| 1.1 生物大分子液体核磁共振 | 第11-18页 |
| 1.1.1 异核多维NMR多维谱及蛋白质主链归属 | 第11-13页 |
| 1.1.2 蛋白质分子动力学NMR研究 | 第13-16页 |
| 1.1.3 顺磁弛豫速率增强技术 | 第16-17页 |
| 1.1.4 ~(19)F核磁共振在蛋白质研究中的应用 | 第17-18页 |
| 1.2 新德里金属β-内酰胺酶-1 | 第18-23页 |
| 1.2.1 抗生素与超级细菌 | 第18页 |
| 1.2.2 金属β-内酰胺酶 | 第18-19页 |
| 1.2.3 新德里金属β-内酰胺酶-1 | 第19-23页 |
| 2 新德里金属β-内酰胺酶-1及其突变体的表达与纯化 | 第23-33页 |
| 2.1 前言 | 第23-24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.2.2 NDM-1重组质粒构建 | 第24-26页 |
| 2.2.3 NDM-1突变体的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 NDM-1的表达 | 第27-28页 |
| 2.2.5 NDM-1的纯化 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第29-32页 |
| 2.3.1 NDM-1的表达与纯化 | 第29-31页 |
| 2.3.2 NDM-1活性检测 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 3 NDM-1不同功能态的核磁共振研究 | 第33-47页 |
| 3.1 前言 | 第33-34页 |
| 3.2 实验与材料 | 第34-35页 |
| 3.2.1 NMR实验样品 | 第34-35页 |
| 3.2.2 Zn~(2+)滴定apo-NDM-1实验 | 第35页 |
| 3.2.3 NDM-1及其突变体的一维~(19)F实验 | 第35页 |
| 3.2.4 三共振核磁实验及参数 | 第35页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第35-46页 |
| 3.3.1 Zn~(2+)滴定apo-NDM-1的~(19)F NMR实验 | 第35-36页 |
| 3.3.2 NDM-1不同功能态的~(19)F NMR表征及其信号指认 | 第36-38页 |
| 3.3.3 Zn~(2+)滴定apo-NDM-1的~1H-~(15)N TROSY-HSQC谱图分析 | 第38-41页 |
| 3.3.4 锌离子态NDM-1的主链信号归属 | 第41-43页 |
| 3.3.5 PRE实验样品制备存在问题与讨论 | 第43-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 4 日本脑炎病毒衣壳蛋白的表达与纯化 | 第47-54页 |
| 4.1 前言 | 第47-48页 |
| 4.2 材料与方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 JEV-C-△114表达质粒的构建 | 第48页 |
| 4.2.2 JEV-C-△114蛋白表达优化 | 第48-49页 |
| 4.2.3 JEV-C-△114蛋白的纯化 | 第49页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第49-53页 |
| 4.3.1 JEV-C-△114蛋白表达优化 | 第49-50页 |
| 4.3.2 JEV-C-△114蛋白的纯化 | 第50-53页 |
| 4.4 小结 | 第53-54页 |
| 5 总结与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-69页 |
| 附录A 常用培养基配方 | 第60-61页 |
| 附录B 聚丙烯凝胶( SDS-PAGE)电泳法 | 第61-62页 |
| 附录C 质粒转化 | 第62-63页 |
| 附录D 锌离子态NDM-1的~1H、~(13)C、~(15)N化学位移指认结果 | 第63-69页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第69页 |
