| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| 1 骨骼肌生长发育的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1 骨骼肌生长发育 | 第11页 |
| 1.2 miRNAs对骨骼肌生长发育的调控 | 第11-14页 |
| 2 长链非编码RNA（lncRNAs）的研究进展 | 第14-22页 |
| 2.1 lncRNAs的概述 | 第14-15页 |
| 2.2 lncRNAs作用的分子机制 | 第15-17页 |
| 2.3 骨骼肌生长发育相关lncRNAs的研究进展 | 第17-22页 |
| 3 ceRNA与骨骼肌生长发育 | 第22页 |
| 4 课题的研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 5 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 lnc-mg对成肌细胞分化的影响 | 第24-37页 |
| 1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1 细胞 | 第25页 |
| 2.2 实验试剂与耗材 | 第25-26页 |
| 2.3 相关试剂的配制 | 第26页 |
| 3 实验方法 | 第26-31页 |
| 3.1 成肌细胞的复苏、培养、传代和冻存 | 第26-27页 |
| 3.1.1 成肌细胞的复苏和培养 | 第26-27页 |
| 3.1.2 成肌细胞的传代 | 第27页 |
| 3.1.3 成肌细胞的冻存 | 第27页 |
| 3.2 成肌细胞的成肌向诱导分化 | 第27页 |
| 3.3 lnc-mg过表达载体和lnc-mg shRNA敲低载体的构建 | 第27-28页 |
| 3.4 细胞转染 | 第28页 |
| 3.5 免疫荧光染色 | 第28-29页 |
| 3.6 总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 3.7 逆转录 | 第30页 |
| 3.8 荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 3.9 本章所用qPCR引物 | 第31页 |
| 4 实验结果与分析 | 第31-37页 |
| 4.1 敲低lnc-mg对成肌细胞分化的影响 | 第31-33页 |
| 4.1.1 lnc-mg shRNA敲低载体的构建及验证 | 第31-32页 |
| 4.1.2 敲低lnc-mg对成肌细胞分化形态的影响 | 第32-33页 |
| 4.1.3 敲低lnc-mg后成肌分化marker基因检测 | 第33页 |
| 4.2 过表达lnc-mg对成肌细胞分化的影响 | 第33-35页 |
| 4.2.1 lnc-mg过表达载体的构建及验证 | 第33-34页 |
| 4.2.2 过表达lnc-mg对成肌细胞分化形态的影响 | 第34-35页 |
| 4.2.3 过表达lnc-mg后成肌分化marker基因检测 | 第35页 |
| 4.3 小结 | 第35-37页 |
| 第三章 lnc-mg调控骨骼肌分化的分子机制研究 | 第37-60页 |
| 1 实验仪器 | 第37-38页 |
| 2 实验材料 | 第38-41页 |
| 2.1 细胞 | 第38页 |
| 2.2 实验试剂与耗材 | 第38-39页 |
| 2.3 相关试剂的配制 | 第39-41页 |
| 3 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.1 成肌分化过程中，筛选受lnc-mg调控的miRNA | 第41-42页 |
| 3.1.1 基因芯片 | 第41页 |
| 3.1.2 荧光定量PCR检测lnc-mg和miR-125b的表达变化 | 第41-42页 |
| 3.2 lnc-mg和miR-125b潜在结合位点的预测及验证 | 第42-44页 |
| 3.2.1 lnc-mg-Luciferase载体构建 | 第42页 |
| 3.2.2 转化及克隆实验 | 第42-43页 |
| 3.2.3 双荧光素酶报告实验检测lnc-mg与miR-125b的结合 | 第43-44页 |
| 3.3 内源性的lnc-mg和miR-125b结合 | 第44-45页 |
| 3.3.1 Ago2免疫共沉淀 | 第44页 |
| 3.3.2 生物素捕获实验 | 第44-45页 |
| 3.4 lnc-mg对miR-125b靶基因的调节作用 | 第45-46页 |
| 3.4.1 总蛋白的提取 | 第45页 |
| 3.4.2 Western Blot | 第45-46页 |
| 3.4.3 ELISA | 第46页 |
| 3.5 lnc-mg和miR-125b竞争性结合 | 第46-47页 |
| 3.5.1 双荧光素酶报告实验检测lnc-mg和miR-125b竞争性结合Igf2 | 第46-47页 |
| 3.5.2 生物素捕获实验 | 第47页 |
| 3.5.3 Ago2免疫共沉淀 | 第47页 |
| 3.6 本章所用qPCR引物 | 第47页 |
| 4 实验结果与分析 | 第47-60页 |
| 4.1 成肌分化过程中，筛选受lnc-mg调控的miRNA | 第47-50页 |
| 4.1.1 敲低lnc-mg后，miRNA差异表达分析 | 第47-49页 |
| 4.1.2 lnc-mg与miR-125b表达水平负相关 | 第49-50页 |
| 4.2 lnc-mg和miR-125b潜在结合位点的预测及验证 | 第50-53页 |
| 4.3 内源性的lnc-mg和miR-125b结合 | 第53-55页 |
| 4.4 lnc-mg对miR-125b靶基因Igf2的调节作用 | 第55页 |
| 4.5 lnc-mg和miR-125b竞争性结合 | 第55-58页 |
| 4.6 分子机制模式图 | 第58页 |
| 4.7 小结 | 第58-60页 |
| 第四章 全文总结 | 第60-61页 |
| 1 全文结论 | 第60页 |
| 2 问题与展望 | 第60页 |
| 3 本研究创新点 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 在校发表论文 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
