| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-17页 |
| 1.杆状病毒概述 | 第12-13页 |
| 2.杆状病毒的基因研究 | 第13-14页 |
| 3.家蚕杆状病毒表达系统研究进展 | 第14-15页 |
| 4.Red同源重组系统的研究进展 | 第15-17页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第17-20页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第17页 |
| 2.2 主要研究内容 | 第17-19页 |
| 2.2.1 bm64 基因特性鉴定 | 第17页 |
| 2.2.2 bm64 基因功能研究 | 第17-19页 |
| 2.3 实验方案 | 第19-20页 |
| 2.3.1 bm64 基因特性鉴定技术路线 | 第19页 |
| 2.3.2 bm64 基因功能研究技术路线 | 第19-20页 |
| 第三章bm64 基因特性鉴定 | 第20-32页 |
| 3.1 实验设备及试剂 | 第20页 |
| 3.2 家蚕杆状病毒基因bm64 的生物信息学分析 | 第20-22页 |
| 3.2.1 生物信息学工具 | 第20-21页 |
| 3.2.2 bm64 基因生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 3.3 Bm64 蛋白的原核表达和多克隆抗体制备 | 第22-27页 |
| 3.3.1 重组原核表达载体pGEX-4T3bm64 的构建 | 第22-24页 |
| 3.3.2 融合蛋白的表达和纯化 | 第24页 |
| 3.3.3 多克隆抗体制备 | 第24页 |
| 3.3.4 实验结果 | 第24-27页 |
| 3.3.4.1 原核表达载体pGEX-4T3bm64 构建 | 第24-25页 |
| 3.3.4.2 融合蛋白GST-Bm64 的表达和纯化 | 第25-27页 |
| 3.3.4.3 Bm64 蛋白的多克隆抗体制备 | 第27页 |
| 3.4 bm64 基因转录时相检测 | 第27-29页 |
| 3.4.1 real-time PCR检测bm64 转录时相 | 第27-28页 |
| 3.4.2 real-time PCR结果分析 | 第28-29页 |
| 3.5 Bm64 蛋白的亚细胞定位 | 第29-31页 |
| 3.5.1 细胞冻存 | 第29页 |
| 3.5.2 细胞复苏与培养 | 第29页 |
| 3.5.3 间接免疫荧光实验 | 第29-30页 |
| 3.5.4 实验结果 | 第30-31页 |
| 3.6 讨论 | 第31-32页 |
| 第四章bm64 基因功能研究 | 第32-52页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第32页 |
| 4.2 bm64 基因缺失型及其补回型的重组杆粒构建 | 第32-39页 |
| 4.2.1 实验方法 | 第32-36页 |
| 4.2.1.1 替代基因片段的获得 | 第32-33页 |
| 4.2.1.2 Bacmid-⊿bm64 的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.1.3 pFASTBac-Dual-egfp-ph、pFASTBac-Dual-egfp-ph-bm64 的构建23 | 第34-35页 |
| 4.2.1.4 Bacmid-egfp-ph、Bacmid-⊿bm64-egfp-ph、Bacmid-bm64rep-egfp-ph构建 | 第35-36页 |
| 4.2.2 实验结果 | 第36-39页 |
| 4.2.2.1 替代基因片段的获得 | 第36页 |
| 4.2.2.2 Bacmid-⊿bm64 的构建 | 第36-37页 |
| 4.2.2.3 pFASTBac-Dual-egfp-ph、pFASTBac-Dual-egfp-ph-bm64 的构建26 | 第37-38页 |
| 4.2.2.4 Bacmid-egfp-ph、Bacmid-⊿bm64-egfp-ph、Bacmid-bm64rep-egfp-ph构建 | 第38-39页 |
| 4.3 bm64 基因缺失对BmNPV感染的影响 | 第39-41页 |
| 4.3.1 三种重组质粒的提取 | 第39页 |
| 4.3.2 三种重组质粒转染BmN细胞 | 第39页 |
| 4.3.3 实验结果 | 第39-41页 |
| 4.4 bm64 基因缺失对重组病毒复制滴度的影响 | 第41-42页 |
| 4.4.1 病毒滴度的测定 | 第41-42页 |
| 4.4.2 病毒滴度测定结果与分析 | 第42页 |
| 4.5 bm64 基因缺失对病毒基因组复制的影响 | 第42-45页 |
| 4.5.1 real-time PCR标准曲线绘制 | 第42-43页 |
| 4.5.2 病毒基因组的提取 | 第43页 |
| 4.5.3 Real-time PCR检测病毒基因组复制 | 第43-44页 |
| 4.5.4 实验结果 | 第44-45页 |
| 4.6 bm64 基因缺失对病毒各时相基因转录的影响 | 第45-47页 |
| 4.6.1 细胞总RNA的提取 | 第45页 |
| 4.6.2 Real-time PCR分析bm64 缺失对病毒早、晚、极晚期基因的转录影响344.6.3 实验结果 | 第45-47页 |
| 4.7 bm64 基因缺失后蛋白表达检测 | 第47-50页 |
| 4.7.1 Western Blot | 第47-48页 |
| 4.7.2 实验结果 | 第48-50页 |
| 4.7.2.1 蛋白标准曲线 | 第48-49页 |
| 4.7.2.2 Bm64 蛋白表达的Western Blot检测 | 第49-50页 |
| 4.8 讨论 | 第50-52页 |
| 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
