酶法合成甘露糖-6-磷酸
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第20-30页 |
| 1.1 引言 | 第20页 |
| 1.2 甘露糖-6-磷酸概述 | 第20-24页 |
| 1.2.1 甘露糖-6-磷酸简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2 甘露糖-6-磷酸的作用以及应用前景 | 第21-22页 |
| 1.2.3 甘露糖-6-磷酸合成方法 | 第22-24页 |
| 1.3 多聚磷酸盐依赖型激酶概述 | 第24-25页 |
| 1.3.1 多聚磷酸盐简介 | 第24页 |
| 1.3.2 多聚磷酸盐依赖型激酶简介 | 第24-25页 |
| 1.4 检测方法 | 第25-27页 |
| 1.4.1 甘露糖-6-磷酸检测方法 | 第25-26页 |
| 1.4.2 多聚磷酸盐检测方法 | 第26-27页 |
| 1.5 糖类磷酸化合物的分离 | 第27-28页 |
| 1.6 本论文的研究思路和内容 | 第28-30页 |
| 第二章 基因工程菌的构建 | 第30-44页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2.1 菌株质粒和引物 | 第30页 |
| 2.2.2 培养基 | 第30-31页 |
| 2.2.3 试剂和仪器 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.1 基因的克隆与重组载体构建 | 第31-33页 |
| 2.3.2 基因诱导表达 | 第33页 |
| 2.3.3 粗酶制备 | 第33页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.5 酶催化验证 | 第34页 |
| 2.3.6 M6P检测 | 第34-36页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第36-43页 |
| 2.4.1 l7基因表达载体构建 | 第36页 |
| 2.4.2 mp基因表达载体构建 | 第36页 |
| 2.4.3 l7基因表达蛋白电泳验证 | 第36-37页 |
| 2.4.4 mp基因表达蛋白电泳验证 | 第37-38页 |
| 2.4.5 L7酶催化验证 | 第38-42页 |
| 2.4.6 MP酶催化验证 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 酶学基本性质研究 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44页 |
| 3.2.1 试剂 | 第44页 |
| 3.2.2 仪器 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.3.1 酶的纯化 | 第44-45页 |
| 3.3.2 酶活测定 | 第45-46页 |
| 3.3.3 最适温度 | 第46页 |
| 3.3.4 最适pH | 第46页 |
| 3.3.5 最适多聚磷酸盐供体 | 第46页 |
| 3.3.6 二价金属离子对酶活的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.7 基本动力学参数 | 第47页 |
| 3.3.8 最适底物摩尔比 | 第47页 |
| 3.3.9 MP合成甘露糖-6-磷酸 | 第47页 |
| 3.4 实验结果及分析 | 第47-54页 |
| 3.4.1 最适温度 | 第47-48页 |
| 3.4.2 最适pH | 第48-49页 |
| 3.4.3 最适多聚磷酸盐供体 | 第49页 |
| 3.4.4 二价金属离子对酶活的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.5 基本动力学参数 | 第50-52页 |
| 3.4.6 最适底物摩尔比 | 第52-53页 |
| 3.4.7 MP合成甘露糖-6-磷酸 | 第53-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 蛋白表达条件优化 | 第56-70页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 试剂和仪器 | 第56页 |
| 4.2.2 培养基 | 第56-57页 |
| 4.3 实验方法 | 第57-59页 |
| 4.3.1 L7与MP对比 | 第57页 |
| 4.3.2 培养基优化 | 第57页 |
| 4.3.3 诱导温度与诱导剂添加浓度优化 | 第57-58页 |
| 4.3.4 诱导方式与诱导时间优化 | 第58页 |
| 4.3.5 溶氧对蛋白表达的影响 | 第58页 |
| 4.3.6 高密度发酵 | 第58-59页 |
| 4.4 实验结果及分析 | 第59-69页 |
| 4.4.1 L7与MP对比 | 第59页 |
| 4.4.2 培养基优化 | 第59-61页 |
| 4.4.3 诱导温度与诱导剂添加浓度优化 | 第61-65页 |
| 4.4.4 诱导方式与诱导时间优化 | 第65-66页 |
| 4.4.5 溶氧对蛋白表达的影响 | 第66-67页 |
| 4.4.6 高密度发酵 | 第67-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 甘露糖-6-磷酸的合成 | 第70-82页 |
| 5.1 引言 | 第70页 |
| 5.2 实验材料 | 第70页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第70页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第70页 |
| 5.3 实验方法 | 第70-73页 |
| 5.3.1 甘露糖检测方法 | 第70页 |
| 5.3.2 反应时间优化 | 第70-71页 |
| 5.3.3 反应温度优化 | 第71页 |
| 5.3.4 反应pH优化 | 第71页 |
| 5.3.5 底物摩尔比优化 | 第71页 |
| 5.3.6 最适缓冲溶液 | 第71-72页 |
| 5.3.7 酶量的优化 | 第72页 |
| 5.3.8 甘露糖-6-磷酸合成 | 第72页 |
| 5.3.9 反应pH调控方式探索 | 第72-73页 |
| 5.4 实验结果及分析 | 第73-80页 |
| 5.4.1 反应时间优化 | 第73-74页 |
| 5.4.2 反应温度优化 | 第74页 |
| 5.4.3 反应pH优化 | 第74-75页 |
| 5.4.4 底物摩尔比优化 | 第75-76页 |
| 5.4.5 最适缓冲溶液 | 第76页 |
| 5.4.6 酶量优化 | 第76-78页 |
| 5.4.7 甘露糖-6-磷酸合成 | 第78-79页 |
| 5.4.8 反应pH调控方式探索 | 第79-80页 |
| 5.5 本章小结 | 第80-82页 |
| 第六章 结论及创新点 | 第82-84页 |
| 6.1 本文主要结论 | 第82-83页 |
| 6.2 创新点 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第94-96页 |
| 作者及导师简介 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97-98页 |
