| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 L-天冬氨酸 α-脱羧酶简介 | 第7页 |
| 1.2 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的产物及其应用 | 第7-8页 |
| 1.3 L-天冬氨酸 α-脱羧酶来源及研究进展 | 第8-9页 |
| 1.4 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的形成机制和结构 | 第9-10页 |
| 1.5 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的催化机制及其底物抑制 | 第10-13页 |
| 1.5.1 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的催化机制 | 第10页 |
| 1.5.2 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的抑制 | 第10-13页 |
| 1.6 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的应用 | 第13页 |
| 1.7 本课题的立题意义和研究内容 | 第13-15页 |
| 1.7.1 立题意义 | 第13-14页 |
| 1.7.2 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 工具酶和各种试剂 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-23页 |
| 2.2.1 PanD基因序列的合成 | 第16-17页 |
| 2.2.2 重组质粒pET28a(+)-panD的构建 | 第17页 |
| 2.2.3 E. coli BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第17页 |
| 2.2.4 重组菌E. coli BL21(DE3)/pET28a(+)-panD的诱导表达 | 第17页 |
| 2.2.5 Tricine-SDS-PAGE | 第17-18页 |
| 2.2.6 L-天冬氨酸 α-脱羧酶的蛋白纯化 | 第18页 |
| 2.2.7 L-天冬氨酸 α-脱羧酶原酶的激活 | 第18-19页 |
| 2.2.8 蛋白浓度测定 | 第19页 |
| 2.2.9 L-天冬氨酸 α-脱羧酶酶活力的测定 | 第19-20页 |
| 2.2.10 L-天冬氨酸 α-脱羧酶动力学常数的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.11 L-天冬氨酸 α-脱羧酶底物抑制验证实验 | 第21页 |
| 2.2.12 L-天冬氨酸 α-脱羧酶失活速率的测定 | 第21页 |
| 2.2.13 反应温度和pH对重组PanD的影响 | 第21页 |
| 2.2.14 重组PanD最适温度及热稳定性测定 | 第21-22页 |
| 2.2.15 重组PanD的转化实验 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-39页 |
| 3.1 重组菌E. coli DE3/pET28a-panD的诱导表达 | 第23-27页 |
| 3.1.1 panD基因序列的合成 | 第23页 |
| 3.1.2 重组菌E. coli DE3/pET28a(+)-panD的构建 | 第23-24页 |
| 3.1.3 重组PanD的诱导表达 | 第24-26页 |
| 3.1.4 重组PanD粗酶酶活的检测 | 第26页 |
| 3.1.5 小结 | 第26-27页 |
| 3.2 重组PanD的纯化和原酶的激活 | 第27-31页 |
| 3.2.1 重组PanD的纯化 | 第27页 |
| 3.2.2 重组PanD的纯酶的酶活 | 第27-28页 |
| 3.2.3 重组PanD的原酶的自剪切情况 | 第28页 |
| 3.2.4 重组PanD的氨基酸序列进化关系 | 第28-29页 |
| 3.2.5 重组PanD原酶的激活 | 第29-30页 |
| 3.2.6 孵育时间对酶活的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.7 小结 | 第31页 |
| 3.3 重组PanD的反应条件和动力学参数 | 第31-35页 |
| 3.3.1 反应温度和pH对酶活的影响 | 第31-33页 |
| 3.3.2 重组PanD的动力学参数的测定 | 第33-34页 |
| 3.3.3 L-天冬氨酸对重组PanD的抑制作用的验证 | 第34页 |
| 3.3.4 重组PanD失活速率的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.5 小结 | 第35页 |
| 3.4 两种重组PanD的酶学性质及转化作用 | 第35-39页 |
| 3.4.1 两种重组PanD氨基酸序列对比与分析 | 第35-36页 |
| 3.4.2 两种重组PanD最适温度与热稳定性 | 第36页 |
| 3.4.3 重组PanD最适pH与pH稳定性 | 第36-37页 |
| 3.4.4 重组酶的转化实验 | 第37页 |
| 3.4.5 小结 | 第37-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-41页 |
| 主要结论 | 第39页 |
| 展望 | 第39-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
