| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 前言 | 第13-15页 |
| 第2章 材料与方法 | 第15-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第15页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第16-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-35页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第18页 |
| 2.2.2 人脂肪干细胞微泡的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.3 血管再生实验 | 第19-20页 |
| 2.2.4 电镜检测 | 第20页 |
| 2.2.5 Western blot | 第20-21页 |
| 2.2.6 小RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.7 HUVEC的RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.8 Bioanalyzer RNA analysis | 第23页 |
| 2.2.9 RT-PCR分析miRNA | 第23-26页 |
| 2.2.10 MicroRNAs基因芯片分析 | 第26页 |
| 2.2.11 构建重组慢病毒 | 第26-27页 |
| 2.2.12 构建重组腺病毒 | 第27页 |
| 2.2.13 细胞转染 | 第27-28页 |
| 2.2.14 主动脉环实验 | 第28-29页 |
| 2.2.15 Mitrigel Plug实验 | 第29-30页 |
| 2.2.16 血红蛋白的检测 | 第30页 |
| 2.2.17 免疫组化 | 第30-31页 |
| 2.2.18 RT-PCR检测mRNA | 第31-33页 |
| 2.2.19 核蛋白的提取 | 第33页 |
| 2.2.20 荧光素酶活性实验 | 第33页 |
| 2.2.21 流式细胞仪检测 | 第33-34页 |
| 2.2.22 β-gal染色 | 第34页 |
| 2.2.23 β-gal实验 | 第34页 |
| 2.2.24 细胞增殖实验 | 第34-35页 |
| 2.2.25 微泡及其携带的miRNA进入靶细胞并发挥作用 | 第35页 |
| 2.3 统计学分析 | 第35-36页 |
| 第3章 实验设计和实验结果 | 第36-69页 |
| 3.1 脂肪干细胞内皮分化能力较低 | 第36-37页 |
| 3.2 干细胞的条件培养液有促血管再生作用 | 第37-41页 |
| 3.2.1 脂肪干细胞的培养上清液促进人脐静脉内皮细胞迁移 | 第37-38页 |
| 3.2.2 脂肪干细胞的培养上清液促进人脐静脉内皮细胞管样结构形成 | 第38-39页 |
| 3.2.3 经微泡分泌抑制剂GW4869处理的脂肪干细胞的培养上清液剂量依赖性的抑制人脐静脉内皮细胞迁移 | 第39-40页 |
| 3.2.4 经微泡分泌抑制剂GW4869处理的脂肪干细胞的培养上清液剂量依赖性的抑制人脐静脉内皮细胞管样结构形成 | 第40-41页 |
| 3.3 脂肪干细胞微泡有促血管再生作用 | 第41-46页 |
| 3.3.1 脂肪干细胞微泡形态 | 第41-42页 |
| 3.3.2 GW4869剂量依赖性的抑制脂肪干细胞微泡的分泌 | 第42页 |
| 3.3.3 脂肪干细胞微泡在靶细胞中发挥作用 | 第42-44页 |
| 3.3.4 脂肪干细胞微泡促进人脐静脉内皮细胞迁移 | 第44页 |
| 3.3.5 脂肪干细胞微泡促进人脐静脉内皮细胞管样结构形成 | 第44-45页 |
| 3.3.6 脂肪干细胞微泡对人脐静脉内皮细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| 3.4 脂肪干细胞微泡RNA分析 | 第46-48页 |
| 3.4.1 脂肪干细胞微泡RNA缺乏28s及18s的rRNA | 第46页 |
| 3.4.2 脂肪干细胞微泡RNA主要是小RNA | 第46-47页 |
| 3.4.3 脂肪干细胞微泡RNA主要是小于40nt的RNA | 第47-48页 |
| 3.5 脂肪干细胞微泡小RNA的miRNAs基因芯片分析 | 第48-50页 |
| 3.6 内皮分化培养液预处理增加了脂肪干细胞微泡miR-31的含量 | 第50-53页 |
| 3.6.1 内皮分化培养液预处理增加了脂肪干细胞微泡的分泌 | 第50页 |
| 3.6.2 内皮分化培养液预处理增加了脂肪干细胞微泡RNA的含量 | 第50-51页 |
| 3.6.3 内皮分化培养液预处理增加了脂肪干细胞微泡miR-31的含量 | 第51-52页 |
| 3.6.4 脂肪干细胞微泡RNA在靶细胞中发挥作用 | 第52-53页 |
| 3.7 MiR-31 参与了脂肪干细胞微泡的促HUVEC血管再生作用 | 第53-59页 |
| 3.7.1 MiR-31促进HUVEC管样结构形成 | 第53-54页 |
| 3.7.2 联合转染微泡小RNA及miR-31抑制剂，抑制内皮分化培养液预处理脂肪干细胞微泡RNA促进HUVEC细胞迁移作用 | 第54-55页 |
| 3.7.3 联合转染微泡小RNA及miR-31抑制剂，抑制内皮分化培养液预处理脂肪干细胞微泡RNA促进HUVEC管样结构形成作用 | 第55-56页 |
| 3.7.4 下调脂肪干细胞miR-31含量可逆转内皮分化培养液预处理促微泡miR-31的分泌 | 第56-57页 |
| 3.7.5 下调脂肪干细胞miR-31含量可逆转内皮分化培养液预处理微泡促进HUVEC细胞迁移作用 | 第57-58页 |
| 3.7.6 下调脂肪干细胞miR-31含量可逆转内皮分化培养液预处理微泡促进HUVEC管样结构形成作用 | 第58-59页 |
| 3.8. 动物实验中，miR-31参与了脂肪干细胞微泡的促血管再生作用 | 第59-62页 |
| 3.8.1 下调脂肪干细胞miR-31含量可逆转内皮分化培养液预处理微泡促进小鼠主动脉环血管生成作用 | 第59-60页 |
| 3.8.2 下调脂肪干细胞miR-31含量可逆转内皮分化培养液预处理微泡促进小鼠Matrigel Plug血管生成作用 | 第60-62页 |
| 3.9 MiR-31通过调节靶基因FIH1而参与脂肪干细胞微泡的促血管再生作用 | 第62-69页 |
| 3.9.1 内皮分化培养液预处理脂肪干细胞微泡miR-31调节多种靶基因水平 | 第62-63页 |
| 3.9.2 MiR-31负向调节FIH1 mRNA水平 | 第63页 |
| 3.9.3 MiR-31负向调节FIH1蛋白水平 | 第63-64页 |
| 3.9.4 MiR-31靶向结合FIH1 3'UTR | 第64-66页 |
| 3.9.5 FIH1是miR-31的靶基因 | 第66页 |
| 3.9.6 下调miR-31水平，逆转了内皮分化培养液预处理脂肪干细胞微泡对FIH1蛋白水平的抑制作用 | 第66-67页 |
| 3.9.7 下调miR-31水平，逆转了内皮分化培养液预处理脂肪干细胞微泡对FIH1的mRNA水平的抑制作用 | 第67-69页 |
| 第4章 讨论 | 第69-73页 |
| 第5章 结论 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第80-81页 |
| 综述 | 第81-87页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
