| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 褪黑激素 | 第10-12页 |
| 1.1.1 褪黑激素 | 第10页 |
| 1.1.2 褪黑激素受体的研究 | 第10页 |
| 1.1.3 褪黑激素对绒毛生长性能影响的研究 | 第10-11页 |
| 1.1.4 褪黑激素对绒毛生长相关基因影响的研究 | 第11-12页 |
| 1.2 RORα基因 | 第12-16页 |
| 1.2.1 RORα基因 | 第12页 |
| 1.2.2 RORα的结构 | 第12-13页 |
| 1.2.3 RORa的配体及作用 | 第13页 |
| 1.2.4 RORα的分布 | 第13-14页 |
| 1.2.5 RORα的功能 | 第14-16页 |
| 1.2.6 RORα与绒毛生长的关系 | 第16页 |
| 1.3 RNA干扰技术 | 第16-20页 |
| 1.3.1 RNA干扰的作用机制 | 第16-17页 |
| 1.3.2 RNA干扰的生物学特点 | 第17-19页 |
| 1.3.3 shRNA | 第19页 |
| 1.3.4 RNA干扰的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 1.5 研究的技术路线 | 第21-22页 |
| 2 研究一 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的体外培养 | 第22-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 试验试剂与耗材 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的体外培养 | 第23-25页 |
| 2.2.2 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.2.3 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的免疫荧光鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3 试验结果 | 第26-29页 |
| 2.3.1 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的形态学分析 | 第26-27页 |
| 2.3.2 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞生长曲线的测定 | 第27-28页 |
| 2.3.3 内蒙古绒山羊皮肤成纤维细胞的免疫学鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 3 研究二 RNA干扰抑制内蒙古绒山羊成纤维细胞内RORα基因的表达 | 第30-47页 |
| 3.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 试验试剂 | 第30页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第30-31页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第31页 |
| 3.2 RORα基因特异性shRNA表达载体的构建 | 第31-35页 |
| 3.2.1 目的基因靶序列设计和合成 | 第31-32页 |
| 3.2.2 shRNA模板的退火反应 | 第32页 |
| 3.2.3 pSGU6/GFP/Neo载体的线性化 | 第32-33页 |
| 3.2.4 pSGU6/GFP/Neo-shRNA载体的构建 | 第33页 |
| 3.2.5 感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 3.2.7 阳性克隆的鉴定与测序 | 第34-35页 |
| 3.2.8 菌液的活化与保存 | 第35页 |
| 3.2.9 质粒提取与检测 | 第35页 |
| 3.3 转染 | 第35-36页 |
| 3.3.1 实验分组 | 第35-36页 |
| 3.3.2 转染步骤 | 第36页 |
| 3.4 荧光显微镜检测shRNA转染效率 | 第36页 |
| 3.5 利用RT-qPCR检测转染前后RORα基因的表达 | 第36-38页 |
| 3.5.1 总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.5.2 RORα基因表达量的检测 | 第37-38页 |
| 3.6 数据分析 | 第38-39页 |
| 3.7 试验结果 | 第39-44页 |
| 3.7.1 RORα基因片段的扩增 | 第39页 |
| 3.7.2 RNAi表达载体pSGU6-shRNA的构建 | 第39-41页 |
| 3.7.3 荧光显微镜检测结果 | 第41页 |
| 3.7.4 RT-qPCR检测结果 | 第41-44页 |
| 3.8 讨论 | 第44-47页 |
| 3.8.1 RNA干扰技术 | 第44-45页 |
| 3.8.2 转染 | 第45页 |
| 3.8.3 RNAi对内蒙古绒山羊成纤维细胞中RORα表达的影响 | 第45-47页 |
| 4 研究三 RORα基因表达下调对β-catenin、SFRP1、TCHHL1基因的影响 | 第47-54页 |
| 4.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第47页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 试验仪器 | 第47-48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48页 |
| 4.2.1 引物的设计与合成 | 第48页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR | 第48页 |
| 4.3 试验结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 相关基因的扩增和熔解曲线的绘制 | 第48-49页 |
| 4.3.2 利用荧光定量PCR检测β-catenin、SFRP1、TCHHL1基因的表达 | 第49-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
