| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-21页 |
| 1.1 伪狂犬病的概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 伪狂犬病的流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 伪狂犬病病毒的分子生物学特性 | 第13-16页 |
| 1.1.3 伪狂犬病病毒的潜伏感染 | 第16-17页 |
| 1.2 酵母双杂交技术的概述 | 第17-20页 |
| 1.2.1 酵母双杂交技术原理 | 第18页 |
| 1.2.2 酵母双杂交技术的分类及应用 | 第18-20页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 构建pGBKT7-EP0诱饵质粒 | 第21-39页 |
| 前言 | 第21页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 病毒、菌种和质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 PRV DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 诱饵质粒pGBKT7-EP0的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.3 诱饵质粒pGBKT7-EP0的有效性检测 | 第28-32页 |
| 2.3 结果 | 第32-37页 |
| 2.3.1 EP0基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.2 诱饵质粒pGBKT7-EP0的酶切和测序鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3 诱饵质粒pGBKT7-EP0自激活性检测 | 第34-35页 |
| 2.3.4 诱饵质粒pGBKT7-EP0毒性效应检测 | 第35页 |
| 2.3.5 酵母质粒pGBKT7-EP0 DNA的抽提及PCR检测 | 第35-36页 |
| 2.3.6 诱饵质粒pGBKT7-EP0表达蛋白Western-blot检测 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 PK-15细胞酵母双杂交cDNA文库构建及鉴定 | 第39-55页 |
| 前言 | 第39页 |
| 3.1 材料 | 第39-42页 |
| 3.1.1 病毒、菌种和质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.4 培养基配制 | 第40-42页 |
| 3.2 方法 | 第42-49页 |
| 3.2.1 PK-15细胞的培养 | 第42-43页 |
| 3.2.2 cDNA合成及扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.3 cDNA的均一化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 cDNA扩增产物的酶切与纯化回收 | 第45页 |
| 3.2.5 酶切后的cDNA扩增产物与三框表达载体的连接 | 第45-46页 |
| 3.2.6 连接产物的转化 | 第46页 |
| 3.2.7 库容量和插入片段大小的检测及文库质粒提取 | 第46-47页 |
| 3.2.8 提取文库质粒 | 第47-48页 |
| 3.2.9 将文库质粒转入Y187酵母感受态细胞 | 第48页 |
| 3.2.10 酵母菌株cDNA文库的收集 | 第48-49页 |
| 3.3 结果 | 第49-53页 |
| 3.3.1 PK-15细胞总RNA提取 | 第49页 |
| 3.3.2 cDNA的合成与均一化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 cDNA的Sfi Ⅰ酶切处理 | 第50页 |
| 3.3.4 初级三框质粒文库插入外源基因片段长度、库容量及重组率检测结果 | 第50-51页 |
| 3.3.5 质粒文库检测结果 | 第51-52页 |
| 3.3.6 cDNA文库的构建及质量检测结果 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54-55页 |
| 全文总结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第68页 |
