| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-50页 |
| 1.1 肾脏纤维化 | 第19-21页 |
| 1.1.1 肾脏纤维化概述 | 第19页 |
| 1.1.2 肾脏纤维化发生和发展过程 | 第19-20页 |
| 1.1.3 上皮间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Tansition, EMT) | 第20页 |
| 1.1.4 肾脏纤维化的分子机制 | 第20-21页 |
| 1.1.5 肾脏纤维化的研究意义 | 第21页 |
| 1.2 DNA甲基化 | 第21-25页 |
| 1.2.1 DNA甲基化概述 | 第21-23页 |
| 1.2.2 DNA甲基化调控 | 第23-24页 |
| 1.2.3 DNA甲基化的作用 | 第24页 |
| 1.2.4 DNA甲基化与肾脏纤维化 | 第24-25页 |
| 1.3 转化生长因子beta (TGFβ) | 第25-26页 |
| 1.3.1 TGFβ概述 | 第25页 |
| 1.3.2 TGFβ信号通路 | 第25-26页 |
| 1.3.3 TGFβ与纤维化 | 第26页 |
| 1.4 Klotho | 第26-32页 |
| 1.4.1 Klotho概述 | 第26-27页 |
| 1.4.2 Klotho基因和蛋白的结构 | 第27-28页 |
| 1.4.3 Klotho在疾病中的功能和作用机制 | 第28-30页 |
| 1.4.4 Klotho的表达 | 第30-32页 |
| 1.5 微小RNA-microRNA | 第32-36页 |
| 1.5.1 microRNA概述 | 第32-33页 |
| 1.5.2 microRNA的形成 | 第33-34页 |
| 1.5.3 microRNA调控基因表达的机制 | 第34页 |
| 1.5.4 miRNA的表达调控 | 第34-35页 |
| 1.5.5 miRNA与肾脏纤维化 | 第35页 |
| 1.5.6 miR-148/miR-152家族与miR-30家族 | 第35-36页 |
| 1.6 研究背景 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-50页 |
| 第二章 TGFβ诱导纤维化肾脏Klotho启动子超甲基化及Klotho表达下降 | 第50-84页 |
| 2.1 前言 | 第50-51页 |
| 2.2 实验材料 | 第51-56页 |
| 2.2.1 实验动物及细胞 | 第51页 |
| 2.2.2 主要仪器及设备 | 第51-52页 |
| 2.2.3 主要试剂与材料 | 第52-54页 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 | 第54-56页 |
| 2.3 实验方法 | 第56-69页 |
| 2.3.1 动物造模 | 第56-57页 |
| 2.3.2 HE及Masson染色 | 第57-58页 |
| 2.3.3 Western Blot | 第58-61页 |
| 2.3.4 qRT-PCR | 第61-64页 |
| 2.3.5 甲基特异性PCR(MSP) | 第64-66页 |
| 2.3.6 荧光报告素酶实验 | 第66-69页 |
| 2.3.7 统计学分析 | 第69页 |
| 2.4 实验结果 | 第69-78页 |
| 2.4.1 纤维化肾脏组织中Klotho表达下降 | 第69-71页 |
| 2.4.2 肾脏纤维化模型中Klotho启动子甲基化异常增加 | 第71-73页 |
| 2.4.3 纤维化肾脏组织中DNMTs表达异常 | 第73-74页 |
| 2.4.4 TGFβ是Klotho异常高甲基化的主要诱因 | 第74-78页 |
| 2.5 讨论 | 第78-80页 |
| 小结 | 第80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 第三章 TGFβ通过分别抑制miR-152和miR-30a诱导DNMT1和DNMT3a及Klotho启动子超甲基化的表达 | 第84-102页 |
| 3.1 前言 | 第84-85页 |
| 3.2 实验材料 | 第85页 |
| 3.2.1 实验动物及细胞 | 第85页 |
| 3.2.2 主要仪器及设备 | 第85页 |
| 3.2.3 主要试剂与材料 | 第85页 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 | 第85页 |
| 3.3 试验方法 | 第85-89页 |
| 3.3.1 qRT-PCR检测miR-152表达 | 第85-87页 |
| 3.3.2 抑制TGFβ信号通路和甲基化 | 第87页 |
| 3.3.3 过表达miR-152和miR-30a | 第87-88页 |
| 3.3.4 DNMT1和DNMT3a干扰实验 | 第88-89页 |
| 3.4 实验结果 | 第89-98页 |
| 3.4.1 TGFβ促进miR-152和miR-30a的表达 | 第89-91页 |
| 3.4.2 miR-152和miR-30a能够分别抑制TGFβ诱导的DNMT1和DNMT3a表达 | 第91-93页 |
| 3.4.3 5Aza抑制甲基化能逆转TGFβ诱导的Klotho低表达 | 第93-95页 |
| 3.4.4 DNMT1和DNMT3a共同调控Klotho启动子甲基化和基因表达 | 第95-98页 |
| 3.5 讨论 | 第98-100页 |
| 3.6 小结 | 第100页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 第四章 TGFβ是表观遗传Klotho缺失异常导致肾脏纤维化的关键病理因子 | 第102-112页 |
| 4.1 前言 | 第102页 |
| 4.2 实验材料 | 第102-103页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第102页 |
| 4.2.2 主要仪器及设备 | 第102-103页 |
| 4.2.3 主要试剂及材料 | 第103页 |
| 4.2.4 主要溶液的配制 | 第103页 |
| 4.3 试验方法 | 第103-104页 |
| 4.3.1 BSP实验 | 第103-104页 |
| 4.4 实验结果 | 第104-108页 |
| 4.4.1 SB431542能够有效改善肾脏纤维化 | 第104-106页 |
| 4.4.2 SB431542能够抑制肾脏纤维化过程中Klotho启动子的甲基化并增加Klotho表达 | 第106-108页 |
| 4.5 讨论 | 第108-110页 |
| 4.6 小结 | 第110页 |
| 参考文献 | 第110-112页 |
| 第五章 Klotho是TGFβ-DNMTs轴异常促进肾脏纤维化的关键介导蛋白 | 第112-125页 |
| 5.1 前言 | 第112页 |
| 5.2 实验材料 | 第112-113页 |
| 5.2.1 实验动物及细胞 | 第112-113页 |
| 5.2.2 主要仪器及设备 | 第113页 |
| 5.2.3 主要试剂与材料 | 第113页 |
| 5.2.4 主要溶液的配制 | 第113页 |
| 5.3 试验方法 | 第113-114页 |
| 5.3.1 细胞干扰Klotho表达实验 | 第113页 |
| 5.3.2 小鼠干扰Klotho表达实验 | 第113-114页 |
| 5.4 实验结果 | 第114-119页 |
| 5.4.1 5Aza能够有效缓解肾脏纤维化 | 第114-115页 |
| 5.4.2 TGFβ-DNMTs通过Klotho缓解肾脏纤维化 | 第115-119页 |
| 5.5 讨论 | 第119-122页 |
| 5.6 小结 | 第122页 |
| 参考文献 | 第122-125页 |
| 全文总结 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-132页 |
| 附录一 | 第128-129页 |
| 附录二 | 第129-132页 |
