摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
文献综述 | 第13-24页 |
第一章 细胞周期研究概况 | 第13-20页 |
1.1 细胞周期简介 | 第13页 |
1.2 影响细胞周期的因素 | 第13-16页 |
1.2.1 细胞周期蛋白(Cyclin) | 第14页 |
1.2.2 细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs) | 第14-15页 |
1.2.3 细胞周期抑制蛋白(CKIs) | 第15页 |
1.2.4 细胞周期检查点(cell cycle checkpoints) | 第15-16页 |
1.3 细胞周期调控研究进展 | 第16-20页 |
1.3.1 对细胞增殖调控的探索 | 第16-17页 |
1.3.2 细胞周期停滞的分子机制 | 第17-18页 |
1.3.3 细胞周期与肿瘤的关系 | 第18-19页 |
1.3.4 癌症的治疗 | 第19页 |
1.3.5 细胞周期同步化的方法 | 第19-20页 |
第二章 病毒感染对细胞周期的影响 | 第20-24页 |
2.1 DNA病毒对细胞周期的影响 | 第20-21页 |
2.2 RNA病毒对细胞周期的调控 | 第21页 |
2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对细胞周期的影响 | 第21-23页 |
2.3.1 猪繁殖与呼吸综合征及其病原体概述 | 第21-22页 |
2.3.2 PRRSV感染对细胞影响及细胞周期调控 | 第22-23页 |
2.4 目的及意义 | 第23-24页 |
试验研究 | 第24-49页 |
第三章 PRRSV感染导致MARC-145 细胞周期阻滞在G2/M期 | 第24-35页 |
3.1 材料 | 第24-25页 |
3.1.1 细胞与毒株 | 第24页 |
3.1.2 主要试剂与耗材 | 第24页 |
3.1.3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
3.2 方法 | 第25-27页 |
3.2.1 MARC-145 细胞的培养 | 第25页 |
3.2.2 PRRSV增殖与病毒滴度测定 | 第25-26页 |
3.2.3 间接免疫荧光检测(IFA)PRRSV N蛋白 | 第26页 |
3.2.4 细胞增殖和活力测定 | 第26页 |
3.2.5 Annexin V-PI染色测定细胞凋亡 | 第26页 |
3.2.6 细胞周期检测 | 第26-27页 |
3.3 结果与分析 | 第27-33页 |
3.3.1 PRRSV感染抑制MARC-145 细胞增殖 | 第27-31页 |
3.3.2 PRRSV感染诱导MARC-145 细胞凋亡 | 第31-32页 |
3.3.3 PRRSV感染导致MARC-145 细胞周期阻滞在G2/M期 | 第32-33页 |
3.4 讨论 | 第33-34页 |
3.5 小结 | 第34-35页 |
第四章 PRRSV感染引起的细胞周期G2/M期阻滞与p53/p21信号通路活化有关 | 第35-43页 |
4.1 材料 | 第35-36页 |
4.1.1 细胞与毒株 | 第35页 |
4.1.2 主要试剂与耗材 | 第35-36页 |
4.1.3 主要仪器设备 | 第36页 |
4.2 方法 | 第36-38页 |
4.2.1 细胞培养 | 第36页 |
4.2.2 细胞感染与样品收集 | 第36页 |
4.2.3 MARC-145 细胞的Nocodazole处理 | 第36页 |
4.2.4 Western blot检测 | 第36-37页 |
4.2.5 间接免疫荧光(IFA)检测 | 第37页 |
4.2.6 免疫共沉淀(CoIP)检测 | 第37-38页 |
4.3 结果与分析 | 第38-41页 |
4.3.1 PRRSV感染引起MARC-145 细胞CyclinB1表达升高 | 第38页 |
4.3.2 PRRSV感染上调磷酸化Cdc2(p-Cdc2)(Tyr15)的表达 | 第38-39页 |
4.3.3 PRRSV感染导致p53信号通路上细胞周期调节蛋白表达改变 | 第39-41页 |
4.4 讨论 | 第41-42页 |
4.5 小结 | 第42-43页 |
第五章 PRRSV感染导致的细胞周期G2/M期阻滞与Chk/Cdc25信号通路活化有关 | 第43-49页 |
5.1 材料 | 第43-44页 |
5.1.1 细胞与毒株 | 第43页 |
5.1.2 试剂与耗材 | 第43页 |
5.1.3 仪器设备 | 第43-44页 |
5.2 方法 | 第44-45页 |
5.2.1 细胞培养 | 第44页 |
5.2.2 细胞感染与样品收集 | 第44页 |
5.2.3 实时荧光定量PCR(qPCR)检测 | 第44-45页 |
5.2.4 Western Blot检测 | 第45页 |
5.2.5 IFA检测 | 第45页 |
5.3 结果与分析 | 第45-47页 |
5.3.1 Wee1、Myt1、Cdc25C与 1433σ mRNA转录水平检测结果 | 第45-46页 |
5.3.2 PRRSV感染对细胞周期调节蛋白Wee1、Myt1和Cdc25C的影响 | 第46-47页 |
5.3.3 PRRSV感染对Chk/Cdc25通路上检测点Chk1的影响 | 第47页 |
5.4 讨论 | 第47-48页 |
5.5 小结 | 第48-49页 |
结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
附录 | 第56-59页 |
缩略词 | 第59-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
作者简介 | 第61页 |