| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 背景 | 第8-18页 |
| 1.1 SAMHD1研究进展 | 第8-16页 |
| 1.1.1 艾滋病的研究进展 | 第8-9页 |
| 1.1.2 SAMHD1的简介 | 第9-10页 |
| 1.1.3 SAMHD1的发现 | 第10-11页 |
| 1.1.4 SAMHD1的结构解析 | 第11-13页 |
| 1.1.5 SAMHD1的抗病毒机制 | 第13-16页 |
| 1.2 本课题研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 实验材料、原理和方法 | 第18-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 扩增菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 表达菌株和表达载体 | 第18页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 培养基及储液 | 第19-20页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验原理 | 第21-26页 |
| 2.2.1 基因克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.2 目的蛋白的表达 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的蛋白的纯化 | 第24页 |
| 2.2.4 蛋白质的结晶 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.3.1 目的基因片段SAMHD1（109-626）的制备 | 第26-28页 |
| 2.3.2 载体pET-28a的制备 | 第28页 |
| 2.3.3 目的基因片段与载体的连接 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组质粒的转化 | 第29页 |
| 2.3.5 转化产物的PCR验证 | 第29-30页 |
| 2.3.6 保存菌种 | 第30页 |
| 2.3.7 测序 | 第30-31页 |
| 2.3.8 转化产物的小量表达 | 第31页 |
| 2.3.9 小量表达筛选目标蛋白的最优表达条件 | 第31-32页 |
| 2.3.10 大量表达目标蛋白 | 第32页 |
| 2.3.11 Ni柱亲和层析对目的蛋白进行纯化 | 第32-34页 |
| 2.3.12 凝胶过滤色谱纯化目的蛋白 | 第34-35页 |
| 2.3.13 SAMHD1c蛋白的状态分析 | 第35-37页 |
| 2.3.14 蛋白浓缩与结晶条件筛选 | 第37-38页 |
| 2.3.15 结晶条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.3.16 晶体的X-ray衍射 | 第39页 |
| 2.3.17 SAMHD1c蛋白的透析 | 第39页 |
| 2.3.18 高效液相色谱测定蛋白的三磷酸水解酶活性 | 第39-41页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第41-57页 |
| 3.1 重组质粒pET-28a-SAMHD1(109-626)的构建 | 第41-43页 |
| 3.1.1 目的基因片段SAMHD1c的制备及扩增 | 第41页 |
| 3.1.2 目的基因片段SAMHD1的酶切 | 第41-42页 |
| 3.1.3 转化产物的PCR验证 | 第42-43页 |
| 3.1.4 转化产物的测序验证 | 第43页 |
| 3.2 目的蛋白的表达和纯化 | 第43-46页 |
| 3.2.1 重组蛋白的小量表达及最优表达条件的筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.2 Ni柱亲和层析纯化目的蛋白 | 第44页 |
| 3.2.3 Superdex 200 纯化目的蛋白 | 第44-46页 |
| 3.3 人源SAMHD1c寡聚状态及酶活的分析 | 第46-47页 |
| 3.4 人源SAMHD1的结晶及解析 | 第47-49页 |
| 3.4.4 人源SAMHD1结晶条件的筛选 | 第47-48页 |
| 3.4.5 人源SAMHD1晶体的优化 | 第48-49页 |
| 3.4.6 人源SAMHD1晶体结构的解析 | 第49页 |
| 3.5 人源SAMHD1c结构的描述及分析 | 第49-53页 |
| 3.6 实验讨论 | 第53-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
