| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1 秀丽小杆线虫简介 | 第13-15页 |
| 1.1 秀丽小杆线虫的生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.2 秀丽小杆线虫作为模式生物的优势 | 第14-15页 |
| 2 秀丽隐杆线虫先天免疫信号转导途径 | 第15-21页 |
| 2.1 MAPK信号转导通路 | 第17-18页 |
| 2.2 DAF-2 信号转导通路 | 第18-19页 |
| 2.3 TGF-β信号转导通路 | 第19-20页 |
| 2.4 PCD信号转导通路 | 第20-21页 |
| 3 苏云金芽孢杆菌杀虫机制研究 | 第21-24页 |
| 3.1 苏云金芽孢杆菌的生物学特征及活性物质 | 第21页 |
| 3.2 苏云金芽孢杆菌的杀虫机制 | 第21-22页 |
| 3.3 Cry6A与Cry5B结构及作用方式的差异 | 第22-24页 |
| 4 RNA干扰技术的作用机制及应用 | 第24-25页 |
| 5 立题依据及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-41页 |
| 1 材料 | 第26-32页 |
| 1.1 供试菌株及秀丽小杆线虫 | 第26页 |
| 1.2 载体 | 第26页 |
| 1.3 培养基 | 第26页 |
| 1.4 抗生素 | 第26-27页 |
| 1.5 抗体 | 第27页 |
| 1.6 PCR引物合成 | 第27页 |
| 1.7 主要试剂和试剂盒 | 第27-28页 |
| 1.7.1 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.7.2 主要试剂盒 | 第28页 |
| 1.8 相关溶液配制 | 第28-31页 |
| 1.9 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-41页 |
| 2.1 Cry6A对秀丽小杆线虫pmk-1、pmk-2、pmk-3 mRNA转录水平的影响 | 第32-33页 |
| 2.1.1 Cry6A蛋白诱导表达 | 第32页 |
| 2.1.2 Cry6A蛋白作用于秀丽小杆线虫 | 第32页 |
| 2.1.3 qRT-PCR检测mRNA转录水平 | 第32-33页 |
| 2.2 Cry6A对秀丽小杆线虫不同突变体PMK-1、PMK-2 蛋白磷酸化水平的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.1 线虫样品的处理 | 第33页 |
| 2.2.2 western blot检测 | 第33-34页 |
| 2.3 秀丽小杆线虫pmk-2 基因的RNA干扰 | 第34-37页 |
| 2.3.1 秀丽小杆线虫总RNA的提取及逆转录 | 第34页 |
| 2.3.2 pmk-2 基因干扰载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.3.3 pmk-2 基因的RNA干扰实验 | 第36-37页 |
| 2.3.4 秀丽小杆线虫pmk-2 基的RNA干扰效果检测 | 第37页 |
| 2.4 Cry6A对pmk-2 基因干扰后秀丽小杆线虫半致浓度测定实验 | 第37-38页 |
| 2.4.1 苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry6A的提取及浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.4.2 Cry6A对秀丽小杆线虫半致死浓度实验 | 第38页 |
| 2.5 Cry6A对秀丽小杆线虫pmk-2、sek-1、nsy-1 线虫突变体LC50的测定 | 第38页 |
| 2.6 秀丽小杆线虫PMK-1、PMK-2 蛋白的原核表达 | 第38-41页 |
| 2.6.1 秀丽小杆线虫总RNA的提取及逆转录 | 第39页 |
| 2.6.2 pmk-1，pmk-2 原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.6.3 PMK-1，PMK-2 蛋白的诱导表达 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-58页 |
| 1 Cry6A对秀丽小杆线虫pmk-1、pmk-2、pmk-3 基因转录水平的影响 | 第41-43页 |
| 1.1 Cry6A蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| 1.2 秀丽小杆线虫总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 1.3 qRT-PCR检测Cry6A毒素对秀丽小杆线虫PMK-2 蛋白转录水平的影响 | 第42-43页 |
| 2 Cry6A对秀丽小杆线虫PMK-1、PMK-2 蛋白磷酸化水平的影响 | 第43-48页 |
| 2.1 Cry6A对秀丽小杆线虫N2 PMK-2 蛋白磷酸化水平的影响 | 第43-44页 |
| 2.2 PMK-2 上游激酶的检测 | 第44-48页 |
| 2.2.1 Cry6A毒素作用PMK-1 上游激酶sek-1 和nsy-1 突变体后PMK-2 蛋白磷酸化水平的检测 | 第44-45页 |
| 2.2.2 sek-1 和nsy-1 突变体对Cry6A毒素作用的敏感性检测 | 第45-48页 |
| 3 秀丽小杆线虫pmk-2 基因的RNA干扰 | 第48-51页 |
| 3.1 pmk-2 基因的RNA干扰载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.2 pmk-2 基因干扰载体菌株喂食线虫 | 第50页 |
| 3.3 pmk-2 基因干扰效果检测 | 第50-51页 |
| 4 Cry6A对pmk-2 基因干扰后秀丽小杆线虫半致浓度测定 | 第51-54页 |
| 5 秀丽小杆线虫PMK-1、PMK-2 蛋白的原核表达 | 第54-58页 |
| 5.1 重组质粒p ET28a-pmk-1、p RSETA-pmk-2 的构建 | 第54-55页 |
| 5.2 PMK-1 和PMK-2 蛋白的诱导表达 | 第55-57页 |
| 5.3 PMK-1 和PMK-2 蛋白质谱分析 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-60页 |
| 秀丽小杆线虫对Cry6A的防御反应 | 第58-60页 |
| 第五章 结论 | 第60-61页 |
| 1 Cry6A能诱导pmk-2 mRNA转录水平的上升 | 第60页 |
| 2 Cry6A能激活PMK-1 和PMK-2 蛋白发生磷酸化 | 第60页 |
| 3 pmk-2 基因沉默后的秀丽小杆线虫对Cry6A的敏感性增强 | 第60页 |
| 4 SEK-1 和NSY-1 是PMK-2 蛋白参与秀丽小杆线虫防御Cry6A毒素蛋白的上游激酶 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文专利 | 第70-71页 |
| 课题受资助的基金项目 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
