英文缩略词及中文对照表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 引言 | 第11-21页 |
·群体感应系统 | 第11-12页 |
·群体感应系统的概念 | 第11-12页 |
·群体感应系统的分子调控机制 | 第12-17页 |
·枯草芽孢杆菌群体感应调节的分子机制 | 第12-17页 |
·群体感应系统与生物膜 | 第17-20页 |
·生物膜 | 第17页 |
·群体感应系统与生物膜之间的联系 | 第17-20页 |
·基因打靶技术 | 第20页 |
·同源重组技术 | 第20页 |
·本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-35页 |
·材料 | 第21-23页 |
·菌株与质粒 | 第21页 |
·仪器与试剂 | 第21-22页 |
·仪器 | 第21页 |
·生化及分子生物学试剂 | 第21-22页 |
·溶液与培养基配置 | 第22-23页 |
·溶液配制 | 第22页 |
·培养基配制 | 第22-23页 |
·试验方法 | 第23-35页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应基因comQXPA基因克隆 | 第23-28页 |
·基因组DNA的提取(CTAB/NaCl法) | 第23页 |
·群体感应comQXPA基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
·琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第24-25页 |
·PCR产物回收 | 第25-26页 |
·PCR回收产物和pMD18-T克隆载体的连接 | 第26页 |
·E. coli DH5α 感受态的制备(采用CaCl2法) | 第26页 |
·连接产物转化E. coli DH5α | 第26页 |
·菌落PCR检测 | 第26-27页 |
·质粒提取 | 第27页 |
·序列测定 | 第27-28页 |
·序列分析 | 第28页 |
·comA基因突变株的构建 | 第28-34页 |
·comA基因突变株构建方法设计 | 第28-29页 |
·突变引物设计 | 第29页 |
·PEBA20基因组DNA的提取(CTAB/NaCl法) | 第29-30页 |
·comA基因同源前、后臂的PCR扩增 | 第30-31页 |
·同源前臂comAF与同源后臂comAB的克隆 | 第31页 |
·comAF与comAB的单酶切 | 第31页 |
·comAF与comAB酶切产物的连接 | 第31页 |
·comAF-comAB与pMD18-T连接 | 第31-32页 |
·comAF-comAB-pMD18-T的转化及验证 | 第32页 |
·自杀质粒pk18mobsacB的提取 | 第32页 |
·comAF-comAB-pMD18-T与自杀质粒pk18mobsacB的双酶切 | 第32页 |
·comAF-comAB-pMD18-T与自杀质粒pk18mobsacB双酶切产物的连接 | 第32-33页 |
·comAF-comAB-pk18mobsacB转化E. coli T1及PCR验证 | 第33页 |
·comAF-comAB-pk18mobsacB质粒的提取及PCR验证 | 第33页 |
·PEBA20感受态细胞的制备 | 第33页 |
·comAF-comAB-pk18mobsacB转化入PEBA20感受态细胞 | 第33页 |
·卡那筛选一次重组PEBA20菌体及PCR验证 | 第33-34页 |
·筛选二次重组PEBA20菌体 | 第34页 |
·二次重组PEBA20菌体的验证 | 第34页 |
·comA突变株的生物膜表型测定 | 第34页 |
·comA基因缺失突变株固气界面生物膜表型测定 | 第34页 |
·comA基因缺失突变株气液界面生物膜表型测定 | 第34页 |
·comA基因缺失突变株抗菌活性测定 | 第34-35页 |
·comA基因缺失突变株无菌发酵液的制备 | 第34-35页 |
·PEBA20野生株和comA基因缺失突变株生长曲线的测定 | 第35页 |
·comA基因缺失突变株菌活体抑菌活性的检测 | 第35页 |
3 结果与分析 | 第35-49页 |
·基因组DNA的提取 | 第35页 |
·群体感应基因comQXPA基因的克隆 | 第35-42页 |
·群体感应基因comQXPA的PCR扩增 | 第35-36页 |
·群体感应基因comQXPA的克隆 | 第36页 |
·序列分析 | 第36-42页 |
·comA基因突变株的构建 | 第42-45页 |
·同源前臂comAF与同源后臂comAB的PCR扩增、单酶切及连接 | 第42-43页 |
·comAF-comAB-PMD18-T转化至大肠杆菌E.coli DH5α | 第43页 |
·comAF-comAB-PMD18-T质粒与自杀质粒PK18mobsacB的双酶切 | 第43-44页 |
·comAF-comAB与PK18mobsacB双酶切产物的连接及转化至大肠杆菌E. coli T1.343.3.5 comAF-comAB-PK18重组质粒电转化至解淀粉芽孢杆菌PEBA20 | 第44-45页 |
·comA基因缺失突变株的生物膜表型 | 第45-47页 |
·固气界面生物膜形态 | 第45-46页 |
·气液界面生物膜形态 | 第46-47页 |
·抑菌活性的测定 | 第47-49页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20野生株和comA基因缺失突变株生长曲线的测定 | 第47-48页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20野生型菌株和comA基因缺失突变株菌活体对真菌性病害抑菌活性的测定 | 第48-49页 |
4 讨论 | 第49-52页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应系统 | 第49-50页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应基因簇生物信息学分析 | 第50-51页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20 comA基因缺失突变株的构建 | 第51页 |
·自杀质粒pk18mobsacB | 第51页 |
·外源DNA导入宿主细胞 | 第51页 |
·B. amyloliquefaciens PEBA20 comA基因缺失突变株生物膜及抗菌活性检测 | 第51-52页 |
5 结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-61页 |
附录 | 第61-62页 |
致谢 | 第62-63页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第63页 |