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解淀粉芽孢杆菌PEBA20群体感应基因簇的克隆及相关特性研究

英文缩略词及中文对照表第1-9页
中文摘要第9-10页
Abstract第10-11页
1 引言第11-21页
   ·群体感应系统第11-12页
     ·群体感应系统的概念第11-12页
   ·群体感应系统的分子调控机制第12-17页
     ·枯草芽孢杆菌群体感应调节的分子机制第12-17页
   ·群体感应系统与生物膜第17-20页
     ·生物膜第17页
     ·群体感应系统与生物膜之间的联系第17-20页
   ·基因打靶技术第20页
     ·同源重组技术第20页
   ·本研究的目的及意义第20-21页
2 材料与方法第21-35页
   ·材料第21-23页
     ·菌株与质粒第21页
     ·仪器与试剂第21-22页
       ·仪器第21页
       ·生化及分子生物学试剂第21-22页
     ·溶液与培养基配置第22-23页
       ·溶液配制第22页
       ·培养基配制第22-23页
   ·试验方法第23-35页
     ·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应基因comQXPA基因克隆第23-28页
       ·基因组DNA的提取(CTAB/NaCl法)第23页
       ·群体感应comQXPA基因的PCR扩增第23-24页
       ·琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物第24-25页
       ·PCR产物回收第25-26页
       ·PCR回收产物和pMD18-T克隆载体的连接第26页
       ·E. coli DH5α 感受态的制备(采用CaCl2法)第26页
       ·连接产物转化E. coli DH5α第26页
       ·菌落PCR检测第26-27页
       ·质粒提取第27页
       ·序列测定第27-28页
       ·序列分析第28页
     ·comA基因突变株的构建第28-34页
       ·comA基因突变株构建方法设计第28-29页
       ·突变引物设计第29页
       ·PEBA20基因组DNA的提取(CTAB/NaCl法)第29-30页
       ·comA基因同源前、后臂的PCR扩增第30-31页
       ·同源前臂comAF与同源后臂comAB的克隆第31页
       ·comAF与comAB的单酶切第31页
       ·comAF与comAB酶切产物的连接第31页
       ·comAF-comAB与pMD18-T连接第31-32页
       ·comAF-comAB-pMD18-T的转化及验证第32页
       ·自杀质粒pk18mobsacB的提取第32页
       ·comAF-comAB-pMD18-T与自杀质粒pk18mobsacB的双酶切第32页
       ·comAF-comAB-pMD18-T与自杀质粒pk18mobsacB双酶切产物的连接第32-33页
       ·comAF-comAB-pk18mobsacB转化E. coli T1及PCR验证第33页
       ·comAF-comAB-pk18mobsacB质粒的提取及PCR验证第33页
       ·PEBA20感受态细胞的制备第33页
       ·comAF-comAB-pk18mobsacB转化入PEBA20感受态细胞第33页
       ·卡那筛选一次重组PEBA20菌体及PCR验证第33-34页
       ·筛选二次重组PEBA20菌体第34页
       ·二次重组PEBA20菌体的验证第34页
     ·comA突变株的生物膜表型测定第34页
       ·comA基因缺失突变株固气界面生物膜表型测定第34页
       ·comA基因缺失突变株气液界面生物膜表型测定第34页
     ·comA基因缺失突变株抗菌活性测定第34-35页
       ·comA基因缺失突变株无菌发酵液的制备第34-35页
       ·PEBA20野生株和comA基因缺失突变株生长曲线的测定第35页
       ·comA基因缺失突变株菌活体抑菌活性的检测第35页
3 结果与分析第35-49页
   ·基因组DNA的提取第35页
   ·群体感应基因comQXPA基因的克隆第35-42页
     ·群体感应基因comQXPA的PCR扩增第35-36页
     ·群体感应基因comQXPA的克隆第36页
     ·序列分析第36-42页
   ·comA基因突变株的构建第42-45页
     ·同源前臂comAF与同源后臂comAB的PCR扩增、单酶切及连接第42-43页
     ·comAF-comAB-PMD18-T转化至大肠杆菌E.coli DH5α第43页
     ·comAF-comAB-PMD18-T质粒与自杀质粒PK18mobsacB的双酶切第43-44页
     ·comAF-comAB与PK18mobsacB双酶切产物的连接及转化至大肠杆菌E. coli T1.343.3.5 comAF-comAB-PK18重组质粒电转化至解淀粉芽孢杆菌PEBA20第44-45页
   ·comA基因缺失突变株的生物膜表型第45-47页
     ·固气界面生物膜形态第45-46页
     ·气液界面生物膜形态第46-47页
   ·抑菌活性的测定第47-49页
     ·B. amyloliquefaciens PEBA20野生株和comA基因缺失突变株生长曲线的测定第47-48页
     ·B. amyloliquefaciens PEBA20野生型菌株和comA基因缺失突变株菌活体对真菌性病害抑菌活性的测定第48-49页
4 讨论第49-52页
   ·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应系统第49-50页
   ·B. amyloliquefaciens PEBA20群体感应基因簇生物信息学分析第50-51页
   ·B. amyloliquefaciens PEBA20 comA基因缺失突变株的构建第51页
     ·自杀质粒pk18mobsacB第51页
     ·外源DNA导入宿主细胞第51页
   ·B. amyloliquefaciens PEBA20 comA基因缺失突变株生物膜及抗菌活性检测第51-52页
5 结论第52-53页
参考文献第53-61页
附录第61-62页
致谢第62-63页
攻读学位期间发表论文情况第63页

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