| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| ·鱼类耐盐碱研究进展 | 第13-14页 |
| ·瓦氏雅罗鱼 | 第14-15页 |
| ·微卫星分子标记技术 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第16-17页 |
| ·荧光定量PCR的应用 | 第17页 |
| ·RACE技术研究进展 | 第17-18页 |
| ·基因工程育种 | 第18-20页 |
| 第二章 瓦氏雅罗鱼多态性耐碱标记的筛选及关联分析 | 第20-36页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-22页 |
| ·DNA的提取和引物来源 | 第21页 |
| ·EST-SSR的初步筛选 | 第21页 |
| ·碳酸盐碱度耐受实验 | 第21-22页 |
| ·F_2 群体的PCR扩增及检测 | 第22页 |
| ·标记与耐碱性状的关联分析 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-33页 |
| ·EST-SSR标记初步筛选结果 | 第22-26页 |
| ·碱耐受实验结果 | 第26页 |
| ·标记在F_2 群体的筛选与鉴定 | 第26-29页 |
| ·杂交F_2 碱耐受力与标记的关联分析 | 第29-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| 第三章 耐碱候选基因的验证 | 第36-47页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·雅罗鱼 24h碱度耐受实验 | 第37页 |
| ·总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·cDNA第1条链的合成 | 第38-39页 |
| ·引物设计、合成与筛选 | 第39页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系和条件 | 第39-40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·RNA提取质量及单链cDNA合成结果 | 第40-41页 |
| ·特异性引物筛选结果 | 第41-42页 |
| ·候选基因在不同种雅罗鱼、不同时间点的表达 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| ·Rh家族基因功能研究 | 第44-45页 |
| ·荧光定量内参基因的选择 | 第45-47页 |
| 第四章 Rh家族基因全长cDNA的克隆 | 第47-62页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验鱼 | 第47页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-53页 |
| ·SMARTer? RACE c DNA的扩增原理 | 第47-49页 |
| ·特异性引物GSP1、GSPS2 的设计 | 第49页 |
| ·RNA的提取及检测 | 第49页 |
| ·RACE-Ready cDNA的合成 | 第49-51页 |
| ·5'-RACE PCR反应及 3'-RACE PCR反应 | 第51页 |
| ·RACE PCR产物的检测及纯化 | 第51-52页 |
| ·连接转化、测序及拼接 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-61页 |
| ·5'-RACE PCR反应和 3'-RACE PCR反应的扩增结果 | 第53-55页 |
| ·转化、提取质粒、酶切结果 | 第55-56页 |
| ·4个基因测序结果分析及cDNA全长拼接 | 第56页 |
| ·4个基因c DNA的序列信息 | 第56-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·RACE实验操作要领 | 第61-62页 |
| ·cDNA全长的获得及其意义 | 第62页 |
| 结语 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 附录 | 第73页 |
| 致谢 | 第73页 |
