| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-12页 |
| 第一部 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 传染性胸膜肺炎放线杆菌研究进展 | 第12-16页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的概述 | 第12页 |
| ·APP的病原学 | 第12-13页 |
| ·APP的流行病学特征 | 第13页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第13-14页 |
| ·APP的毒力因子研究进展 | 第14-16页 |
| 2 传染性胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 酵母双杂交技术研究进展 | 第17-20页 |
| ·酵母双杂交技术的原理 | 第18页 |
| ·问题及展望 | 第18-20页 |
| 4 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二部 试验研究 | 第21-51页 |
| 第一章 猪肺组织cDNA文库的构建及鉴定 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-29页 |
| ·猪肺组织的采集 | 第22页 |
| ·Trizol法提取猪肺组织的总RNA | 第22-23页 |
| ·RNA纯度和完整性检测 | 第23-24页 |
| ·mRNA的分离及质量检测 | 第24页 |
| ·cDNA的合成 | 第24-25页 |
| ·加5’接头(3个读码框，每个读码框连接一份，共3份） | 第25-26页 |
| ·dscDNA 的检测 | 第26页 |
| ·ds cDNA的纯化 | 第26-27页 |
| ·pGADT7-cDNA重组载体的构建 | 第27页 |
| ·大肠杆菌DH10B感受态的制备(氯化钙法) | 第27-28页 |
| ·电转化入大肠杆菌DH10B感受态细胞 | 第28页 |
| ·检测文库库容 | 第28页 |
| ·文库插入片段的检测 | 第28页 |
| ·收获转化子 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-31页 |
| ·猪肺组织总RNA的提取及质量检测 | 第29页 |
| ·mRNA的质量检测 | 第29-30页 |
| ·cDNA的合成与纯化 | 第30-31页 |
| ·文库库容及转化效率 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·小结 | 第33页 |
| 第二章 APP外膜蛋白OmpA诱饵质粒的构建 | 第33-41页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-37页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·APP-5基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·OmpA基因PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第35页 |
| ·回收产物与载体双酶切 | 第35页 |
| ·pGBKT7-OmpA载体的构建 | 第35页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| ·连接产物转化DH5α | 第36页 |
| ·重组质粒的提取 | 第36页 |
| ·组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·酵母菌株AH109感受态细胞的小量制备 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的转化 | 第37页 |
| ·酵母菌株载体表达与自激活性检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·外膜蛋白OmpA的PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·诱饵质粒的酶切分析和PCR鉴定 | 第38-40页 |
| ·酵母菌表型鉴定 | 第40页 |
| ·诱饵蛋白自激活与毒性检测 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41页 |
| ·小结 | 第41页 |
| 第三章 外膜蛋白OmpA与猪肺组织酵母双杂交阳性克隆子筛选 | 第41-51页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第41-42页 |
| ·培养基机器配制 | 第42页 |
| ·仪器 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·分别提取猪肺组织cDNA文库质粒和pGBKT7-OmpA质粒 | 第42页 |
| ·共转化筛选 | 第42-43页 |
| ·克隆子的筛选 | 第43页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第43页 |
| ·文库质粒的解救与测序 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-50页 |
| ·克隆子的筛选 | 第43-44页 |
| ·阳性克隆子质粒的PCR鉴定 | 第44-46页 |
| ·测序结果预测蛋白的生物信息学分析 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-60页 |
