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猪源OAS抗日本脑炎病毒感染的活性研究

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-13页
第一篇 文献综述第13-43页
 第一章 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的研究进展第13-23页
  1 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的生物学特征第13-15页
   ·2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族基因组成第13-15页
   ·2'-5'-寡腺苷酸合成酶蛋白质结构第15页
  2 2'-5'-寡腺苷酸合成酶的活化机制第15-17页
  3 2'-5'-寡腺苷酸合成酶家族的起源第17页
  4 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族抗病毒的分子机制研究进展第17-20页
   ·依赖于OAS/RNase L途径的抗病毒作用第18-19页
   ·不依赖于RNase L途径的抗病毒作用第19-20页
  5 2'-5'寡腺苷酸系统的生物学功能第20页
  6 2'-5'寡腺苷酸合成酶家族的单核苷酸多态性分析第20-23页
 第二章 日本脑炎病毒及其疫苗的研究进展第23-35页
  1 日本脑炎病毒流行病学特征第23-25页
   ·生态学和流行病学第23页
   ·遗传和抗原多样性第23-24页
   ·传播特征第24-25页
   ·临诊症状第25页
  2 日本脑炎病毒的分子生物学特性第25-28页
   ·基因组结构特征第26页
   ·蛋白结构特征及功能第26-27页
   ·乙型脑炎病毒的复制过程第27-28页
  3 日本脑炎病毒疫苗的研究进展第28-31页
   ·鼠脑纯化灭活疫苗第28-29页
   ·细胞培养减毒活疫苗第29页
   ·细胞培养灭活疫苗第29-30页
   ·基因工程嵌合减毒活疫苗第30页
   ·痘病毒载体重组疫苗第30页
   ·DNA疫苗第30-31页
  4 日本脑炎病毒的诊断方法第31-35页
   ·临床综合诊断第31页
   ·病毒分离与鉴定第31页
   ·血清学诊断第31-32页
   ·分子生物学检测技术第32-35页
 参考文献第35-43页
第二篇 实验部分第43-101页
 第三章 猪源OAS2基因的表达及抗血清的制备第43-59页
  摘要第43页
  1 实验材料第43-45页
   ·细胞株第43-44页
   ·菌种、质粒第44页
   ·实验动物第44页
   ·主要试剂第44页
   ·主要仪器第44页
   ·引物设计与合成第44-45页
   ·主要溶液的配制第45页
  2 实验方法第45-52页
   ·猪源OAS2基因的扩增第45-47页
   ·猪源OAS2原核表达载体的构建第47-50页
   ·重组猪源OAS2蛋白的表达第50-51页
   ·猪源OAS2多克隆抗体的制备第51-52页
   ·猪源OAS2多克隆抗体的鉴定第52页
  3 实验结果第52-55页
   ·猪源OAS2基因的PCR扩增第52页
   ·重组猪源OAS2原核表达质粒的鉴定第52-53页
   ·重组质粒pET-OAS2的表达及鉴定第53-54页
   ·pOAS2抗血清的鉴定第54-55页
  4 讨论第55-56页
  参考文献第56-57页
  ABSTRACT第57-59页
 第四章 猪源OAS基因家族抗JEV感染的初步研究第59-85页
  摘要第59-60页
  1 实验材料第60-62页
   ·细胞和毒株第60页
   ·质粒载体第60页
   ·主要试剂第60-61页
   ·主要仪器第61页
   ·引物设计与合成第61-62页
  2 实验方法第62-68页
   ·猪源OAS基因家族真核表达载体的构建第62-64页
   ·去内毒素小提pFlag-pOAS1b和pcDNA-pOAS2质粒第64页
   ·噬斑形成试验测JEV滴度第64-65页
   ·Real-Time PCR检测PK-15细胞内OAS基因家族的表达量第65-66页
   ·Real-Time PCR检测PK-15细胞中JEV滴度变化量第66-67页
   ·猪源OAS基因家族对JEV增殖影响的间接免疫荧光试验第67页
   ·Western Blot试验检测猪源OAS基因家族对JEV增殖的影响第67-68页
   ·Western Blot试验检测PK-15细胞转染OAS2 siRNA后OAS2蛋白表达量的变化第68页
   ·PK-15细胞RNAi OAS2对JEV增殖的影响第68页
  3 实验结果第68-78页
   ·猪源OAS基因家族真核表达载体的构建第68-70页
     ·重组PFlag-pOASlb真核表达载体的鉴定第68-69页
     ·重组pcDNA-pOAS2真核表达载体的鉴定第69-70页
   ·猪干扰素对JEV增殖的抑制作用第70-71页
   ·猪干扰素诱导猪源OAS基因家族的表达第71-72页
   ·猪干扰素和JEV强毒株共同作用PK细胞OAS表达量变化特征第72-73页
   ·PK-15细胞过表达pOAS蛋白对JEV增殖的影响第73-78页
  4 讨论第78-81页
  参考文献第81-83页
  ABSTRACT第83-85页
 第五章 猪源OAS1编码区SNP特征第85-101页
  摘要第85-86页
  1 实验材料第86-87页
   ·组织样品第86页
   ·主要试剂第86页
   ·主要仪器第86页
   ·溶液的配置第86页
   ·引物设计与合成第86-87页
  2 实验方法第87-89页
   ·猪基因组DNA的提取第87页
   ·猪OAS1编码区外显子的获得第87-88页
   ·PCR产物的回收纯化第88页
   ·试验数据的统计和处理第88-89页
  3 实验结果第89-96页
   ·PCR扩增结果第89-90页
   ·pOAS1a和pOAS1b基因外显子1-6的比较分析第90-92页
   ·pOAS1a基因编码区外显子的SNP检测第92-93页
   ·pOAS1b基因编码区外显子的SNP检测第93-94页
   ·健康猪及乙脑发病猪OAS1编码区SNP特征第94-96页
  4 讨论第96-98页
  参考文献第98-99页
  ABSTRACT第99-101页
全文总结第101-103页
致谢第103页

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