| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 参考文献 | 第16-19页 |
| 第一章 四种sdtSCT型四聚体的制备 | 第19-48页 |
| ·材料 | 第19-23页 |
| ·菌株和载体 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要自配试剂配方 | 第20-23页 |
| ·洗涤包涵体所需试剂 | 第20-21页 |
| ·Bio-ScaleTM Mini Profinity~(TM) IMAC Cartridges纯化所需试剂 | 第21-22页 |
| ·折叠缓冲液(pH 8.5) | 第22页 |
| ·生物素化buffer(pH 8.0) | 第22页 |
| ·P6柱纯化所需试剂 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-35页 |
| ·构建pET22b-InsB_(15-23) sdtSCT等四种原核表达载体 | 第23-31页 |
| ·引物设计 | 第23-25页 |
| ·构建InsB_(15-23) sdtSCT分子 | 第25-27页 |
| ·构建pET22b-InsB_(15-23) sdtSCT原核表达载体 | 第27-30页 |
| ·构建pET22b-InsB_(G9V) sdtSCT原核表达载体 | 第30页 |
| ·构建pET22b-InsB_(Q115E) sdtSCT原核表达载体 | 第30-31页 |
| ·构建pET22b-InsB_(G9V/Q115E) sdtSCT原核表达载体 | 第31页 |
| ·四种sdtSCT型四聚体的制备 | 第31-35页 |
| ·小量诱导表达验证InsB_(15-23) sdtSCT蛋白的表达及表达方式 | 第31页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT蛋白的大量诱导表达及洗涤包涵体 | 第31-32页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT包涵体蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT蛋白稳定性摸索 | 第33页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT蛋白稀释复性 | 第33页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT四聚体的制备 | 第33-35页 |
| ·结果 | 第35-43页 |
| ·四种原核表达载体的构建与鉴定 | 第35-38页 |
| ·四种原核表达载体的构建 | 第35页 |
| ·四种原核表达载体测序鉴定正确 | 第35-38页 |
| ·四种sdtSCT型四聚体的制备 | 第38-43页 |
| ·InsB_(15-25) sdtSCT主要以包涵体形式表达 | 第38页 |
| ·洗涤包涵体初步纯化InsB_(15-25) sdtSCT蛋白 | 第38-39页 |
| ·亲和层析纯化InsB_(15-23) sdtSCT包涵体蛋白 | 第39-40页 |
| ·InsB_(15-23) sdtSCT包涵体蛋白稳定性检验 | 第40-41页 |
| ·四种sdtSCT包涵体蛋白成功复性 | 第41页 |
| ·InsB_(15-23)sdtSCT复性蛋白生物素化 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第二章 dTSCT分子的生物学功能鉴定 | 第48-63页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·小鼠 | 第48页 |
| ·质粒和菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-52页 |
| ·四种sdtSCT型四聚体对NOD小鼠InsB_(15-23)特异性CTLs的检出能力测定 | 第49-50页 |
| ·小鼠外周血单个核细胞的分离 | 第49页 |
| ·脾脏中淋巴细胞的分离 | 第49-50页 |
| ·检测四种sdtSCT型四聚体的非特异性结合比率 | 第50页 |
| ·四种sdtSCT型四聚体对NOD小鼠体内InsB_(15-23)特异性CTLs检出能力的分析 | 第50页 |
| ·真核表达水平检验InsB_(Q115E) mdtSCT的生物学功能 | 第50-52页 |
| ·构建pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体 | 第50-51页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT的表达验证 | 第51页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体体内诱生InsB_(15-23)特异性CTLs能力的验证 | 第51-52页 |
| ·结果 | 第52-58页 |
| ·自制sdtSCT型四聚体和商品化G9V传统五聚体具有类似的低非特异性标记水平 | 第52-54页 |
| ·自制的四种sdtSCT型四聚体与商品化G9V传统五聚体具有类似的检出率 | 第54-55页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·InsB_(Q115E) mdtSCT能在真核细胞表面展示 | 第56-57页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体可以提高NOD小鼠InsB_(15-23)特异性CTLs的频率 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第三章 InsB_(Q115E)mdtSCT对NOD小鼠T1DM发病率的影响 | 第63-74页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·小鼠 | 第63页 |
| ·质粒和菌株 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·质粒大量抽提 | 第64页 |
| ·NOD小鼠的饲养与自然发病率的统计 | 第64页 |
| ·免疫小鼠 | 第64-65页 |
| ·NOD小鼠的血糖连续监测 | 第65页 |
| ·胰岛单个核细胞浸润分析 | 第65-66页 |
| ·IGRP_(206-214) sdtSCT四聚体的制备 | 第66页 |
| ·流式细胞术检测 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-70页 |
| ·NOD小鼠发病率正常 | 第66-67页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体对NOD小鼠T1DM有免疫保护作用 | 第67-70页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体能够降低NOD小鼠的血糖水平 | 第67-68页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体能够降低NOD小鼠T1DM的发病率 | 第68页 |
| ·pcDNA3.1(-)-InsB_(Q115E) mdtSCT真核表达载体能降低NOD小鼠胰岛单个核细胞浸润水平 | 第68-69页 |
| ·InsB_(Q115E) mdtSCT并不通过影响IGRP_(206-214)特异性CTLs水平来保护NOD小鼠 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 综述：1型糖尿病研究进展 | 第75-90页 |
| 1 T1DM的临床特征 | 第75-76页 |
| ·T1DM的发病特点 | 第75-76页 |
| ·T1DM临床发展规律 | 第76页 |
| 2 T1DM的发病机制 | 第76-82页 |
| ·环境因素 | 第76-77页 |
| ·病毒感染 | 第76-77页 |
| ·饮食因素 | 第77页 |
| ·药物 | 第77页 |
| ·遗传因素 | 第77-78页 |
| ·MHC基因 | 第77页 |
| ·胰岛素基因 | 第77-78页 |
| ·细胞免疫学因素 | 第78-80页 |
| ·T细胞 | 第78-79页 |
| ·抗原递呈细胞 | 第79-80页 |
| ·分子免疫学因素 | 第80-82页 |
| ·胰岛素 | 第80-81页 |
| ·GAD65 | 第81-82页 |
| ·IGRP | 第82页 |
| 3 NOD小鼠与T1DM | 第82-83页 |
| 4 T1DM的治疗 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第91-92页 |
