鹿源布鲁氏菌外膜蛋白Omp31基因的克隆与原核表达
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| ·布鲁氏菌病国内外的流行状况 | 第11-12页 |
| ·世界范围内的布鲁氏菌病疫情 | 第11页 |
| ·国内布鲁氏菌病的疫情 | 第11-12页 |
| ·布鲁氏菌病的病原学 | 第12-13页 |
| ·布鲁氏菌的感染过程及症状 | 第13-14页 |
| ·布鲁氏菌病疫苗的研究进展 | 第14-15页 |
| ·布鲁氏菌病的诊断方法 | 第15-16页 |
| ·关于外膜蛋白Omp31的研究进展 | 第16-17页 |
| ·研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 布鲁氏菌Omp31基因的扩增及载体构建 | 第18-28页 |
| ·材料和方法 | 第18-20页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·溶液配制 | 第18-20页 |
| ·培养菌种所用溶液 | 第18-19页 |
| ·感受态细胞制备所用试剂 | 第19页 |
| ·琼脂糖凝胶所用试剂 | 第19-20页 |
| ·实验操作步骤 | 第20-25页 |
| ·pMD18T-Omp31克隆载体的构建 | 第20-23页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·细菌的培养 | 第20页 |
| ·菌落PCR扩增 | 第20页 |
| ·目的片段的回收 | 第20-21页 |
| ·回收目的片段与pMD18-T载体的连接 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·转化到DH5α感受态细胞 | 第22页 |
| ·菌落PCR | 第22-23页 |
| ·pET28a-Omp31表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·酶切 | 第24页 |
| ·目的片段的回收 | 第24页 |
| ·连接 | 第24页 |
| ·转化 | 第24-25页 |
| ·PCR筛选、测序 | 第25页 |
| ·质粒提取 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-28页 |
| ·PCR扩增结果 | 第25-26页 |
| ·pMD18T-Omp31克隆载体构建结果 | 第26页 |
| ·pMD18T-Omp31克隆载体双酶切结果 | 第26-27页 |
| ·pET28a-Omp31克隆载体构建结果 | 第27-28页 |
| 3 布鲁氏菌Omp31蛋白原核表达及纯化 | 第28-35页 |
| ·材料和方法 | 第28-30页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·溶液配置 | 第28-30页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第28-29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的配置 | 第29页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第29-30页 |
| ·实验操作步骤 | 第30-32页 |
| ·蛋白诱导 | 第30-31页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·小量诱导 | 第30页 |
| ·大量诱导 | 第30-31页 |
| ·蛋白纯化 | 第31-32页 |
| ·蛋白的变性 | 第31-32页 |
| ·Ni柱纯化 | 第32页 |
| ·结果分析 | 第32-35页 |
| ·小量诱导结果 | 第32-33页 |
| ·超声及纯化结果 | 第33-35页 |
| 4 Omp31蛋白的Western Blot鉴定 | 第35-39页 |
| ·材料和方法 | 第35-37页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·溶液配置 | 第35-36页 |
| Western Blot所用试剂 | 第35-36页 |
| ·主要方法步骤 | 第36-37页 |
| ·用BCA蛋白定量试剂盒测蛋白浓度 | 第36-37页 |
| ·Western Blot验证蛋白活性 | 第37页 |
| ·结果分析 | 第37-39页 |
| ·BCA法蛋白浓度测定结果 | 第37-38页 |
| ·Western Blot结果 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 6 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 附录 | 第46页 |
