| 导师简介 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-17页 |
| ·WAP抗菌肽简介 | 第15页 |
| ·WAP抗菌肽的研究意义 | 第15-17页 |
| 第二章 wap在转基因果蝇的染色体定位和表达水平分析 | 第17-25页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第17-18页 |
| ·实验材料 | 第17-18页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验方法 | 第18-19页 |
| ·果蝇饲养 | 第18页 |
| ·遗传杂交法定位wap基因在转基因果蝇染色体的插入位点 | 第18-19页 |
| ·wap在转基因果蝇体内的表达水平分析 | 第19页 |
| ·结果与分析 | 第19-23页 |
| ·wap在转基因果蝇染色体定位的结果 | 第19-21页 |
| ·qRT-PCR分析wap在转基因果蝇体内RNA水平表达结果 | 第21-23页 |
| ·结论 | 第23-25页 |
| 第三章 WAP抗菌肽在果蝇体内的抗菌功能 | 第25-29页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第25-26页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·菌液的制备 | 第26页 |
| ·实验组果蝇与对照组果蝇的制备 | 第26-27页 |
| ·果蝇存活与死亡情况的观察比较 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-28页 |
| ·结论 | 第28-29页 |
| 第四章 WAP抗菌肽在真核表达系统的表达 | 第29-37页 |
| ·实验材料与仪器试剂 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验仪器 | 第29页 |
| ·实验试剂 | 第29-30页 |
| ·实验溶液配制 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·wap/pPIC9K表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·WAP抗菌肽基因的钓取与扩增 | 第31页 |
| ·wap/pPIC9K表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·酵母的转化 | 第32-33页 |
| ·KM71毕赤酵母菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化 | 第32-33页 |
| ·WAP的诱导表达 | 第33页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第33页 |
| ·诱导表迭 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·wap/pPICPK重组载体构建 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测结果 | 第34-35页 |
| ·结论 | 第35-37页 |
| 第五章 WAP抗菌肽在原核表达系统的表达与功能分析 | 第37-51页 |
| ·实验材料与试剂 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·WAP抗菌肽基因的钓取与扩增 | 第38-39页 |
| ·WAP重组载体的构建与筛选 | 第39-41页 |
| ·酶切 | 第39页 |
| ·连接 | 第39-40页 |
| ·转化 | 第40页 |
| ·筛选阳性转化子,提取重组质粒 | 第40页 |
| ·重组质粒的验证 | 第40-41页 |
| ·WAP体外表达菌株的构建与筛选 | 第41页 |
| ·试表达筛选最优表达条件 | 第41-42页 |
| ·诱导表达时间的摸索 | 第41页 |
| ·诱导剂浓度的摸索 | 第41-42页 |
| ·诱导表达温度的摸索 | 第42页 |
| ·WAP重组蛋白的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·WAP抗菌肽重组蛋白的活性与功能检测 | 第43-44页 |
| ·WAP抗菌肽体外抑蛋白酶活性检测 | 第43页 |
| ·WAP抗菌肽体外抑菌活性检测 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-50页 |
| ·WAP抗菌肽基因的PCR钓取与扩增结果 | 第44页 |
| ·WAP重组载体的构建与筛选结果 | 第44-46页 |
| ·WAP体外表达菌株的构建与筛选结果 | 第46页 |
| ·体外诱导最优条件的确定 | 第46-48页 |
| ·WAP重组蛋白纯化回收的结果 | 第48-49页 |
| ·WAP重组蛋白抑蛋白酶活性的测定结果 | 第49-50页 |
| ·结论 | 第50-51页 |
| 附：第一章 家蝇proPO系统简介 | 第51-53页 |
| 附：第二章 家蝇proPO系统关键基因的鉴定与表达分析 | 第53-69页 |
| ·实验材料与仪器设备 | 第53-54页 |
| ·家蝇与菌种 | 第53页 |
| ·试剂与仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-60页 |
| ·家蝇proPO系统关键基因的鉴定 | 第54-55页 |
| ·家蝇转录组测序 | 第54页 |
| ·转录组序列筛选 | 第54页 |
| ·序列拼接 | 第54页 |
| ·序列分析 | 第54页 |
| ·基因鉴定与分类 | 第54-55页 |
| ·测序验证 | 第55页 |
| ·家蝇proPO系统关键基因的表达模式分析 | 第55-57页 |
| ·提取家蝇幼虫的RNA | 第55页 |
| ·反转录cDNA | 第55-56页 |
| ·qRT-PCR | 第56-57页 |
| ·家蝇mdPAP1的克隆与蛋白重组表达 | 第57-58页 |
| ·mdPAP1基因ORF框的克隆 | 第57-58页 |
| ·mdPAP1重组载体的构建 | 第58页 |
| ·mdPAPP1表达菌株的构建与筛选 | 第58页 |
| ·家蝇酚氧化酶原激活酶的体内RNAi实验 | 第58-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-67页 |
| ·家蝇Serpin基因的鉴定与分类结果 | 第60-63页 |
| ·家蝇proPO系统关键基因的表达模式分析 | 第63-65页 |
| ·家蝇mdPAP1的克隆与蛋白重组表达 | 第65-66页 |
| ·家蝇mdPAP1的体内RNAi实验 | 第66-67页 |
| ·结论 | 第67-69页 |
| 结论与展望 | 第69-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 综述 | 第77-85页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
