| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-30页 |
| 1. 实验背景 | 第9-28页 |
| ·真核细胞的泛素化调控 | 第9-12页 |
| ·Cullin3-BTB蛋白E3连接酶复合物 | 第12-15页 |
| ·小G蛋白RhoA的功能和调控机制 | 第15-17页 |
| ·炭疽杆菌的概况和研究进展 | 第17-20页 |
| ·固有免疫系统 | 第20-23页 |
| ·Inflammasome炎性体 | 第23-25页 |
| ·致死毒素引起的caspase-1的激活机制 | 第25-27页 |
| ·N-端规则(N-end rule) | 第27-28页 |
| 2. 实验对象和实验目的 | 第28-30页 |
| 实验材料和实验方法 | 第30-59页 |
| 1 cDNA、抗体和试剂 | 第30-32页 |
| 2 siRNA | 第32页 |
| 3 分子生物学操作 | 第32-37页 |
| 4 实时定量PCR实验 | 第37-39页 |
| 5 细胞培养和转染 | 第39-44页 |
| 6 免疫印迹、免疫共沉淀 | 第44-47页 |
| 7 免疫荧光 | 第47-48页 |
| 8 爪蟾胚胎操作,原位杂交,以及Morpholino实验 | 第48-53页 |
| 9 原核细胞表达纯化重组蛋白质 | 第53-57页 |
| 10 细胞死亡检测实验 | 第57-59页 |
| 实验结果 | 第59-92页 |
| 第一部分：Cullin3/BACURD泛素E3连接酶复合物降解小G蛋白RhoA并调节细胞运动及胚胎发育 | 第59-79页 |
| 1 哺乳动物细胞内Cul3表达量的降低导致RhoA蛋白水平的提高 | 第59-67页 |
| ·使用RNAi的方法降低细胞内hCul3的表达量会导致细胞出现应力纤维的表型 | 第59-62页 |
| ·hCul3 RNAi的HeLa细胞中,RhoA的蛋白水平上升 | 第62-65页 |
| ·dCul3 RNAi的果蝇S2细胞中,dRhoA的蛋白水平上升 | 第65-67页 |
| 2 在果蝇S2细胞中筛选影响dRho1降解的含有BTB结构域的蛋白质 | 第67-73页 |
| ·利用果蝇S2细胞系筛选影响dRho1蛋白降解的含有BTB结构域的蛋白 | 第67-69页 |
| ·BACURDs蛋白家族 | 第69-71页 |
| ·hBACURD和hCul3通过BTB结构域形成复合物 | 第71-73页 |
| 3 泛素E3连接酶复合体Cullin3/BACURD泛素化RhoA | 第73页 |
| 4 Cul3/BACURD泛素E3连接酶复合物功能异常阻碍爪蟾的早期胚胎发育 | 第73-79页 |
| 第二部分：N端规则控制炭疽致死毒素引起的Nalplb炎性体的激活 | 第79-92页 |
| 1 建立致死毒素激活Nalplb炎性体的实验体系 | 第79-83页 |
| ·J774细胞体系 | 第79-80页 |
| ·原代巨噬细胞BMDM细胞体系 | 第80-81页 |
| ·293T重组体系 | 第81-82页 |
| ·稳定表达RFP-ASC的Raw264.7细胞系 | 第82-83页 |
| 2 蛋白酶体在致死毒素引起的Nalplb炎性体激活过程的重要作用 | 第83-86页 |
| 3 N端规则泛素E3连接酶UBR2参与调节致死毒素介导的Nalplb炎性体的激活 | 第86-92页 |
| 讨论 | 第92-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
