| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 研究背景及意义 | 第9-26页 |
| ·研究背景 | 第9-25页 |
| ·miRNA的产生 | 第10-14页 |
| ·植物MIR基因的起源与进化 | 第10-11页 |
| ·植物miRNA的定义标准 | 第11-12页 |
| ·植物miRNA的产生以及稳定 | 第12-14页 |
| ·RISC复合体的形成 | 第14-18页 |
| ·Argonaute蛋白结构特点 | 第14-15页 |
| ·sRNA的分拣机制 | 第15-17页 |
| ·RISC复合体的形成 | 第17-18页 |
| ·植物miRNA的功能 | 第18-23页 |
| ·植物miRNA调节基因的表达 | 第18-22页 |
| ·植物miRNA切割非编码RNA产生次级siRNA | 第22-23页 |
| ·植物miRNA功能的调节 | 第23-25页 |
| ·本研究的意义 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料与实验方法 | 第26-52页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·酶与生化试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-52页 |
| ·植物培养 | 第26-27页 |
| ·培养土中拟南芥的培养 | 第26-27页 |
| ·1/2MS培养基中拟南芥的培养 | 第27页 |
| ·ABA处理拟南芥幼苗 | 第27页 |
| ·突变体的筛选 | 第27-28页 |
| ·amiR-triOX转基因系的获得 | 第27-28页 |
| ·EMS诱变 | 第28页 |
| ·荧光半定量PCR检测miRNA靶基因的表达 | 第28-31页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA酶消化总RNA中的DNA | 第29页 |
| ·RNA反转录合成cDNA的第一链 | 第29-30页 |
| ·荧光半定量PCR | 第30-31页 |
| ·Northern blot检测miRNA的表达 | 第31-34页 |
| ·植物小RNA的提取 | 第31页 |
| ·小RNA的垂直板电泳 | 第31-32页 |
| ·转膜 | 第32-33页 |
| ·探针标记和杂交 | 第33页 |
| ·洗膜和显影 | 第33-34页 |
| ·图位克隆 | 第34页 |
| ·FTA(Whatman)卡提取植物基因组DNA | 第34页 |
| ·载体构建 | 第34-38页 |
| ·PCR扩增目标片段 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶纯化 | 第35-36页 |
| ·酶切 | 第36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·大肠杆菌热激转化 | 第36-37页 |
| ·碱裂解法小量提取大肠杆菌质粒 | 第37页 |
| ·LR重组反应 | 第37-38页 |
| ·DNA甲基化检测 | 第38-41页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·硫酸氢钠修饰基因组DNA | 第39-40页 |
| ·PCR反应和测序 | 第40-41页 |
| ·拟南芥原生质体瞬时表达 | 第41-44页 |
| ·质粒粗提物的提取 | 第41-42页 |
| ·氯化铯密度梯度离心与质粒纯化 | 第42页 |
| ·原生质体制备和转化 | 第42-44页 |
| ·拟南芥AGO1抗体的纯化和免疫共沉淀 | 第44-48页 |
| ·拟南芥AGO1抗体的制备 | 第44-48页 |
| ·拟南芥AGO1蛋白和sRNA结合活性与切割活性检测 | 第48-50页 |
| ·MiRNA靶基因的转录纯化 | 第48-49页 |
| ·拟南芥AGO1蛋白切割活性检测 | 第49-50页 |
| ·IP-northern | 第50页 |
| ·AGO1与EMA1免疫共沉淀 | 第50-51页 |
| ·分离拟南芥细胞的细胞核和细胞质 | 第51-52页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第52-73页 |
| ·实验结果 | 第52-69页 |
| ·遗传筛选体系的建立以及突变体的筛选 | 第52-60页 |
| ·amiR-triOX转基因系的建立 | 第52页 |
| ·突变体的挑选 | 第52-54页 |
| ·ema1-1突变体的鉴定以及图位克隆 | 第54-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| ·EMA1编码一个Importin β蛋白 | 第60-64页 |
| ·emal-1对ABA的敏感性分析 | 第60-61页 |
| ·T-DNA突变体sad2-5对miRNA通路的影响 | 第61-63页 |
| ·超表达EMA1对miRNA通路的影响 | 第63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| ·EMA1与miRNA通路成员的遗传关系 | 第64-66页 |
| ·emal突变部分挽救hyl1-2突变体的表型 | 第64-65页 |
| ·emal突变不能挽救agol-25突变体的表型 | 第65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| ·SAD2/EMA1在miRNA通路中的功能研究 | 第66-69页 |
| ·emal-1突变体中AGO1和miRNAs的积累水平不变 | 第66-67页 |
| ·emal-1突变体中AGO1和miRNAs在核质中的分布不变 | 第67页 |
| ·emal突变增强了AGO1结合miRNAs和ta-siRNAs的能力和RISC的切割活性 | 第67-69页 |
| ·小结 | 第69页 |
| ·讨论 | 第69-73页 |
| 参考文献 | 第73-89页 |
| 附录 | 第89-99页 |
| 作者简介 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
