| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·研究问题的由来 | 第11-12页 |
| ·文献综述 | 第12-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌及其分泌表达系统简介 | 第12-14页 |
| ·枯草芽孢杆菌的转化 | 第14页 |
| ·穿梭整合表达载体的构建 | 第14-15页 |
| ·枯草芽孢杆菌信号肽对外源蛋白表达的影响 | 第15-16页 |
| ·植物多肽类激素在免疫反应中的研究 | 第16-17页 |
| ·基因对基因原理在植物抗病中的应用 | 第17-19页 |
| ·研究目的 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·实验菌株 | 第20页 |
| ·实验载体 | 第20-21页 |
| ·其他实验材料 | 第21页 |
| ·培养基及溶液 | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器与设备 | 第22-23页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制作及转化方法 | 第23-24页 |
| ·Spizizen法转化枯草芽孢杆菌 | 第23页 |
| ·枯草芽孢杆菌RIK1285菌株感受态细胞的制备及转化 | 第23-24页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·农杆菌电转化感受态的制备 | 第24-25页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第25页 |
| ·大肠杆菌转化方法 | 第25-27页 |
| ·普通热激活法转化大肠杆菌 | 第25-26页 |
| ·快速转化感受态ECOS转化方法 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-69页 |
| ·枯草芽孢杆菌整合载体pHR的构建及转化 | 第27-50页 |
| ·枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭载体pBE2的基本改造 | 第27-32页 |
| ·整合位点基因amyE的5’端和3’端连接到pBE2载体 | 第32-36页 |
| ·抗性基因Kan表达盒连接到pBE2载体 | 第36-38页 |
| ·终止子rrnT1T2连接到pBE2载体 | 第38-40页 |
| ·信号肽nprB的扩增与连接 | 第40-41页 |
| ·玉米ZmPep1基因的扩增及连接 | 第41-43页 |
| ·整合元件与pMarA骨架的连接 | 第43-45页 |
| ·启动子P43的扩增并连接到pMarA | 第45-48页 |
| ·pHR载体转化枯草芽孢杆菌B.subtilis168结果及分析 | 第48-50页 |
| ·玉米ZmPROPEP1基因与pCAMBIA3301表达载体的连接 | 第50-53页 |
| ·玉米ZmPROPEP1基因全长的获取 | 第50-52页 |
| ·玉米ZmPROPEP1基因连接到pCAMBIA3301表达载体 | 第52-53页 |
| ·番茄叶霉菌(Cladosporium fulvum)无毒基因的获取及应用 | 第53-60页 |
| ·avr9基因的合成 | 第53-54页 |
| ·avr9基因表达载体的构建 | 第54-57页 |
| ·avr4基因的扩增 | 第57-58页 |
| ·avr4基因表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·含avr9基因和avr4基因的转化子稳定性分析 | 第60页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体pBE2N的构建及转化 | 第60-64页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体pBE2N的构建 | 第60-61页 |
| ·GFP基因表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·GFP基因在枯草芽孢杆菌WB800中的表达 | 第62-64页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体pHY300LPY的构建及转化 | 第64-65页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体pHY300LPY的构建 | 第64-65页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体pHY300LPY转化WB800 | 第65页 |
| ·不同大小质粒稳定性检测 | 第65-69页 |
| ·无抗生素压力繁殖20代质粒携带情况 | 第66页 |
| ·无抗生素压力繁殖40代质粒携带情况 | 第66-67页 |
| ·无抗生素压力繁殖80代质粒携带情况 | 第67页 |
| ·无抗生素压力繁殖100代质粒携带情况 | 第67-68页 |
| ·无抗生素压力繁殖100代质粒携带情况统计 | 第68-69页 |
| 4 讨论与展望 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
