| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 一 引言 | 第12-14页 |
| 二 材料与方法 | 第14-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第14-15页 |
| ·主要试剂及实验材料 | 第15页 |
| ·主要试剂的配制 | 第15-17页 |
| ·GPR4 cDNA的克隆与表达载体的构建 | 第17-24页 |
| ·人质子感知受体GPR4基因真核表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·GPR4基因干扰表达载体的筛选 | 第26页 |
| ·RT-PCR测定内皮细胞中四种质子感知受体mRNA表达 | 第26-30页 |
| ·过表达GPR4基因的HUVEC细胞及GPR4基因干扰的HUVEC细胞的建立 | 第30-33页 |
| ·LPC及酸性pH对GPR4诱导的炎症因子表达的检测 | 第33-36页 |
| 三 结果与分析 | 第36-57页 |
| ·人质子感知受体GPR4 cDNA的克隆与克隆载体构建 | 第36-38页 |
| ·人质子感知受体GPR4 cDNA的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pCR2.1-GPR4的双酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒pCR2.1-GPR4的测序鉴定 | 第37-38页 |
| ·人质子感知受体GPR4基因真核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·载体构建示意图 | 第38-39页 |
| ·重组表达载体pIRES-EGFP-GPR4双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒pIRES-EGFP-GPR4的测序鉴定 | 第39-40页 |
| ·HUVEC的形态生物学特征及生长曲线 | 第40-41页 |
| ·正常培养的HUVEC细胞图 | 第40页 |
| ·HUVEC细胞生长曲线的绘制 | 第40-41页 |
| ·HUVEC细胞中四种质子感知受体mRNA表达 | 第41-43页 |
| ·过表达GPR4基因的HUVEC细胞的建立 | 第43-45页 |
| ·显微荧光照相 | 第43-44页 |
| ·荧光定量PCR相对定量结果 | 第44-45页 |
| ·GPR4基因干扰的HUVEC细胞的建立 | 第45-49页 |
| ·GPR4干扰载体转染HUVEC显微荧光照相 | 第46-48页 |
| ·荧光定量PCR相对定量结果 | 第48-49页 |
| ·ELISA检测IL-6,TNF-α的表达 | 第49-53页 |
| ·IL-6标准曲线 | 第49页 |
| ·TNF-α标准曲线 | 第49-50页 |
| ·ELISA检测IL-6、TNF-α的表达 | 第50-53页 |
| ·PTX对pH6.8通过GPR4诱导的IL-6,TNF-α的表达没有影响 | 第53-55页 |
| ·NF-κB信号通路参与pH6.8通过GPR4诱导的IL-6,TNF-α的表达过程 | 第55-57页 |
| 四 讨论 | 第57-59页 |
| 五 结论 | 第59-60页 |
| 附录一 | 第60-61页 |
| 附录二 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 文献综述 | 第64-75页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文与参与的科研项目 | 第76页 |
