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甜瓜α-甘露糖苷酶和β-氨基己糖苷酶基因的克隆及表达分析

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-9页
第一章 引言第9-19页
   ·α-甘露糖苷酶研究进展第10-13页
     ·Ⅰ类α-甘露糖苷酶的研究概述第10-12页
     ·Ⅱ类α-甘露糖苷酶研究概述第12页
     ·未分类α-甘露糖苷酶研究概述第12-13页
   ·β-氨基己糖苷酶研究进展第13-16页
     ·GH20 β-氨基己糖苷酶研究进展第13-15页
     ·GH3、GH84 β-氨基己糖苷酶研究进展第15-16页
   ·甜瓜在分子生物学中的前沿及应用第16-18页
   ·研究目的与意义第18-19页
第二章 材料与方法第19-26页
   ·甜瓜α-甘露糖苷酶基因和β-氨基己糖苷酶家族的全基因组分析第19-20页
     ·甜瓜α-Man和β-Hex基因家族成员的鉴定第19页
     ·筛选α-Man和β-Hex完整结构基因第19页
     ·甜瓜与多种植物α-Man和β-Hex的生物信息学分析第19-20页
   ·引物的设计与合成第20-21页
     ·cDNA克隆引物的设计与合成第20页
     ·实时荧光定量引物的设计与合成第20-21页
   ·CmMAN2和CmHEX1 cDNA片段的克隆第21-24页
     ·反转录反应第21页
     ·CmMAN2和CmHEX1基因cDNA序列的PCR扩增第21页
     ·PCR产物纯化第21-22页
     ·连接反应第22页
     ·重组质粒的转化第22页
     ·重组质粒快速提取法筛选阳性转化子第22-23页
     ·重组质粒的PCR鉴定第23页
     ·重组质粒的酶切鉴定第23页
     ·序列测序第23-24页
   ·甜瓜α-man和β-hex基因酶活性测定第24-25页
     ·粗酶液的制备第24页
     ·α-man和β-hex基因酶活性测定第24页
     ·标准曲线的绘制第24-25页
   ·甜瓜CmMAN2和CmHEX1基因在不同发育阶段的果实中与在不同组织中的表达特性分析第25-26页
第三章 结果与分析第26-43页
   ·甜瓜α-甘露糖苷酶基因家族的基因序列分析第26-30页
     ·甜瓜α-Man家族基因的确定第26-27页
     ·α-Man基因的遗传进化分析第27-28页
     ·α-Man基因家族保守motif分析第28-30页
   ·甜瓜β-氨基己糖苷酶基因家族的基因序列分析第30-33页
     ·甜瓜β-Hex基因的确定第30页
     ·β-Hex基因的遗传进化分析第30-32页
     ·β-Hex蛋白的motif分析第32-33页
   ·CmMAN2和CmHEX1 cDNA片段的克隆第33-39页
     ·cDNA克隆产物分析第33页
     ·重组质粒快速提取法的筛选第33-34页
     ·重组质粒菌落PCR检测第34页
     ·重组质粒的酶切鉴定第34-35页
     ·3'端CmMAN2 cDNA片段序列分析第35-37页
     ·CmHEXl cDNA片段序列分析第37-39页
   ·果实发育过程中α-man和β-hex基因酶活性的变化第39-41页
     ·标准曲线的绘制第39页
     ·不同阶段普通甜瓜α-man基因酶活性的测定与分析第39-40页
     ·不同阶段时期β-hex基因酶活性的测定与分析第40页
     ·不同组织中α-man和β-hex基因酶活性的测定与分析第40-41页
   ·甜瓜不同发育成熟阶段CmMAN2和CmHEX1基因的表达特性分析第41-43页
     ·不同发育阶段果实中CmMAN2的表达分析第41页
     ·不同器官中CmMAN2的表达分析第41-42页
     ·不同发育阶段果实中CmHEX1的表达分析第42页
     ·不同器官中CmHEXl的表达分析第42-43页
第四章 讨论与结论第43-46页
   ·讨论第43-45页
     ·α-Man及β-Hex的生物信息学第43-44页
     ·α-man和β-hex基因酶活性变化及表达谱分析第44-45页
   ·结论第45-46页
附录第46-51页
参考文献第51-58页
致谢第58页
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录第58页

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