| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-27页 |
| ·蛋白质组学技术在致病性曲霉研究中的应用 | 第19-24页 |
| ·蛋白质组学基本概念与研究技术 | 第19-20页 |
| ·致病性曲霉蛋白质组学研究的样本制备 | 第20页 |
| ·致病性曲霉的蛋白质组学研究 | 第20-23页 |
| ·蛋白质组学用于曲霉病诊断的研究 | 第23-24页 |
| ·本论文研究的目的、意义、方法及实验方案的设计 | 第24-27页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| ·研究方法及技术 | 第25页 |
| ·研究方案 | 第25-27页 |
| 第二章 用侵袭性曲霉病患者血清筛选特异性反应的烟曲霉蛋白质 | 第27-42页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-33页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·血清样本 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28-29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第29-33页 |
| ·实验方法 | 第33-35页 |
| ·烟曲霉孢子悬液的制备及培养条件 | 第33页 |
| ·烟曲霉蛋白质的制备 | 第33-34页 |
| ·ELISA法 | 第34页 |
| ·免疫印迹 | 第34-35页 |
| ·Bradford法蛋白定量 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·ELISA结果 | 第35-36页 |
| ·免疫印迹分析结果 | 第36页 |
| ·4种培养基所得分泌蛋白质的比较 | 第36-39页 |
| ·6例IA确诊患者血清与烟曲霉YEPG培养基14d分泌蛋白质的免疫印迹 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 用免疫蛋白质组学技术筛选鉴定烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原 | 第42-59页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-46页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·血清样本 | 第43页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43-46页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·烟曲霉菌株及培养条件 | 第46-47页 |
| ·烟曲霉分泌蛋白质的制备 | 第47页 |
| ·蛋白质的2-DE电泳 | 第47-48页 |
| ·半干转印 | 第48-49页 |
| ·硝酸银染色 | 第49页 |
| ·免疫印迹 | 第49页 |
| ·图像采集及分析 | 第49页 |
| ·胶内酶切 | 第49-50页 |
| ·质谱分析 | 第50页 |
| ·数据库查询 | 第50-52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·2-DE及免疫印迹 | 第52-54页 |
| ·免疫原性蛋白质的鉴定 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT的生物信息学分析及克隆表达 | 第59-81页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验材料 | 第59-62页 |
| ·质粒与菌株 | 第59页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| ·血清样本 | 第60页 |
| ·主要试剂的配制 | 第60-62页 |
| ·实验方法 | 第62-70页 |
| ·烟曲霉TR的生物信息学分析 | 第62页 |
| ·引物合成 | 第62-63页 |
| ·烟曲霉总RNA提取 | 第63页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第63-64页 |
| ·烟曲霉TR全长基因的获得 | 第64页 |
| ·烟曲霉TR克隆载体的构建及鉴定 | 第64-67页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第67-69页 |
| ·重组TR蛋白的诱导表达及鉴定 | 第69页 |
| ·重组TR蛋白的纯化 | 第69-70页 |
| ·重组TR蛋白抗原性分析 | 第70页 |
| ·结果 | 第70-79页 |
| ·烟曲霉TR的生物信息学分析结果 | 第70-72页 |
| ·烟曲霉总RNA的提取及TR全长基因的PCR扩增结果 | 第72-73页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定及序列分析 | 第73-76页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第76页 |
| ·重组TR蛋白的诱导表达及纯化 | 第76-77页 |
| ·质谱鉴定重组TR蛋白 | 第77-78页 |
| ·免疫印迹分析重组TR蛋白的抗原性 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 烟曲霉侵袭性感染兔模型的建立 | 第81-86页 |
| ·引言 | 第81页 |
| ·实验材料 | 第81页 |
| ·菌株及实验动物 | 第81页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-82页 |
| ·烟曲霉孢子悬液的制备 | 第81-82页 |
| ·烟曲霉播散性感染兔模型的建立 | 第82页 |
| ·结果 | 第82-84页 |
| ·烟曲霉侵袭性感染家兔生命体征变化 | 第82-83页 |
| ·烟曲霉侵袭性感染兔组织病理学检查 | 第83-84页 |
| ·烟曲霉培养 | 第84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| 第六章 anti-TR抗体检测间接ELISA法的建立及优化 | 第86-92页 |
| ·引言 | 第86页 |
| ·实验材料 | 第86-87页 |
| ·血清样本 | 第86页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第86-87页 |
| ·实验方法 | 第87-88页 |
| ·重组TR蛋白的制备 | 第87页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法的建立 | 第87页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法的优化 | 第87页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法的方法学考察 | 第87-88页 |
| ·结果 | 第88-90页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法条件的优化 | 第88页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法的方法学考察 | 第88-89页 |
| ·IA兔模型不同病程血清测定结果 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-92页 |
| 第七章 anti-TR抗体检测间接ELISA法对IA诊断价值的评估 | 第92-102页 |
| ·引言 | 第92页 |
| ·实验材料 | 第92-93页 |
| ·患者及血清样本收集 | 第92-93页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93-94页 |
| ·重组TR蛋白的制备 | 第93页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法 | 第93页 |
| ·anti-TR抗体检测间接ELISA法cut off值的确定 | 第93页 |
| ·血清GM水平的检测 | 第93-94页 |
| ·统计学处理 | 第94页 |
| ·结果 | 第94-100页 |
| ·ELISA条件的优化 | 第94页 |
| ·ELISA临界值的确定 | 第94页 |
| ·IA患者血清anti-TR和GM水平 | 第94-96页 |
| ·anti-TR抗体检测对非中性粒细胞缺乏症IA患者诊断价值的评估 | 第96-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第八章 主要结论及展望 | 第102-104页 |
| ·主要结论 | 第102页 |
| ·展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 攻读博士学位期间论文发表及参加会议情况 | 第112-113页 |
| 附录A 6例确诊IA患者的组织病理学结果 | 第113-114页 |
| 附录B 所有免疫反应性蛋白点的质谱分析结果 | 第114-125页 |
| 附录C 烟曲霉TR与其他真菌蛋白质同源性分析结果 | 第125-132页 |
| 附录D 粒缺IA患者的临床特征及血清GM和anti-TR结果 | 第132-134页 |
| 附录E 侵袭性真菌病修订定义 | 第134-141页 |
