| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第1章 酿酒酵母CK2和FACT的结构与功能研究进展 | 第11-31页 |
| ·蛋白质磷酸化与蛋白激酶 | 第11-13页 |
| ·蛋白质磷酸化 | 第11页 |
| ·蛋白激酶 | 第11-12页 |
| ·蛋白激酶催化结构域的三维结构 | 第12-13页 |
| ·蛋白激酶CK2 | 第13-22页 |
| ·CK2的功能及组成 | 第13-14页 |
| ·蛋白激酶CK2的催化特征 | 第14-15页 |
| ·CK2是一个结合较强的瞬时复合物 | 第15-17页 |
| ·CK2的组装方式 | 第17-18页 |
| ·CK2全酶的调控机制 | 第18-20页 |
| ·β-亚基对催化亚基的调控 | 第20-21页 |
| ·CK2的结构生物学研究 | 第21-22页 |
| ·CK2、FACT、CHD1之间的相互作用 | 第22-31页 |
| ·染色质重塑 | 第22页 |
| ·CHD1的结构与功能 | 第22-25页 |
| ·yFACT (yeast Facilitator of Chromatin Transcription or Transactions) | 第25-29页 |
| ·CK2与FACT的联系 | 第29-31页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第31-47页 |
| ·基因克隆及质粒构建 | 第31-34页 |
| ·酿酒酵母各亚基的基因克隆和质粒构建 | 第31-32页 |
| ·酿酒酵母CK2α多肽底物的基因克隆和质粒构建 | 第32页 |
| ·酿酒酵母FACT各亚基的基因克隆和质粒构建 | 第32-33页 |
| ·酿酒酵母CHD1的基因克隆和质粒构建 | 第33-34页 |
| ·质粒扩增和鉴定 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·质粒抽提和鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-39页 |
| ·His_6-MBP-CK2α、His_6-MBP-CK2α'、His_6-MBP-CK2β和His_6-MBP-CK2β'的纯化与TEV酶切 | 第35页 |
| ·scCK2α'与scCK2α'的纯化 | 第35-36页 |
| ·scCK2β+scCK2β'的纯化 | 第36-37页 |
| ·酿酒酵母CK2α多肽底物的纯化 | 第37页 |
| ·Spt16-Pob3异二聚体的纯化 | 第37-38页 |
| ·Spt16和Pob3的纯化 | 第38-39页 |
| ·Nhp6A和Vhp6B的纯化 | 第39页 |
| ·scCK2α突变体样品的制备 | 第39-40页 |
| ·scCK2α酶动力学参数测定 | 第40页 |
| ·结晶 | 第40-42页 |
| ·scCK2α及其与配体复合物的结晶 | 第40-41页 |
| ·scCK2α'、scCK2β+scCK2β'及全酶的结晶 | 第41页 |
| ·yFACT组分的结晶 | 第41-42页 |
| ·晶体衍射数据收集及处理 | 第42-44页 |
| ·scCK2α与配体复合物晶体衍射数据收集和处理 | 第42-43页 |
| ·Spt16-N、Pob3-M和Pob3(1-112aa)晶体衍射数据收集及处理 | 第43-44页 |
| ·蛋白-蛋白相互作用 | 第44-46页 |
| ·scCK2调节亚基与His_6-MBP-scCK2α和His_6-MBP-scCK2α~(△93-130)的相互作用分析 | 第44-45页 |
| ·scCK2各亚基间相互作用测定 | 第45页 |
| ·Spt16、Pob3与CK2各亚基间相互作用测定 | 第45-46页 |
| ·Pob3与CHD1各片段间的相互作用测定 | 第46页 |
| ·Pob3(1-112aa)与Pob3-M间的相互作用测定 | 第46页 |
| ·EMSA实验 | 第46-47页 |
| 第3章 实验结果和讨论 | 第47-84页 |
| ·重组scCK2α的酶活分析 | 第47页 |
| ·scCK2α与配体复合物的结构解析 | 第47-54页 |
| ·相位和初始模型的获得 | 第47页 |
| ·模型修正 | 第47-50页 |
| ·scCK2α与配体复合物的模型质量 | 第50-54页 |
| ·scCK2α-辅底物的晶体结构 | 第54页 |
| ·scCK2α的结构和催化特征 | 第54-68页 |
| ·插入序列使scCK2α的活性中心维持更加稳定的开放状态 | 第55-59页 |
| ·scCK2α的活性中心有多种核苷酸-二价阳离子结合模式 | 第59-64页 |
| ·scCK2α中潜在的辅底物水解产物(ADP/GDP)释放途径 | 第64-67页 |
| ·scCK2α铰链区识别ATP/GTP双底物的结构基础 | 第67-68页 |
| ·scCK2亚基间的结合 | 第68-74页 |
| ·体外Pull down实验确定了scCK2的亚基间相互作用 | 第68-70页 |
| ·核苷酸可调节CK2α与调节亚基的结合 | 第70-74页 |
| ·CK2、FACT、CHD1之间相互作用初步探究 | 第74-75页 |
| ·Spt16和Pob3结构解析 | 第75-79页 |
| ·相位和初始模型的获得 | 第75-76页 |
| ·模型修正 | 第76-77页 |
| ·Pob3-M和Pob3 (1-112aa)晶体结构模型质量 | 第77-79页 |
| ·Pob-M和Pob3(1-112aa)的晶体结构及其功能初步探究 | 第79-84页 |
| ·Pob-M的总体结构及其与Pob3(4-104aa)的联系 | 第79-81页 |
| ·Pob3的结合功能 | 第81-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-101页 |
| 附录 | 第101-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第110页 |
