不同环境下天然无结构蛋白α-Synuclein的核磁共振研究
| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| ·天然无结构蛋白α-Synuclein简述 | 第12-16页 |
| ·天然无结构蛋白在生命体中广泛存在 | 第12页 |
| ·天然无结构蛋白AS被认为与帕金森病密切相关 | 第12-13页 |
| ·AS在生理条件下主要以无结构形式存在 | 第13页 |
| ·AS与细胞膜相互作用时会出现不同的结构 | 第13-14页 |
| ·AS易于纤维化,形成的纤维是路易小体的主要成分 | 第14-15页 |
| ·影响AS聚集的多方面因素 | 第15-16页 |
| ·核磁共振波谱学是蛋白质结构研究的手段 | 第16-22页 |
| ·核磁共振简介 | 第18-19页 |
| ·化学位移 | 第19-20页 |
| ·氟NMR谱在蛋白质研究中的应用 | 第20-22页 |
| ·小结 | 第22-23页 |
| 2 天然无结构蛋白AS样品的制备 | 第23-28页 |
| ·质粒转化 | 第24页 |
| ·未标记AS的表达 | 第24页 |
| ·同位素标记的AS的表达 | 第24-25页 |
| ·~(19)F、 ~(15)N标记的AS的表达 | 第25页 |
| ·蛋白样品的纯化 | 第25-28页 |
| 3 低盐与高盐环境下AS构象的NMR研究 | 第28-33页 |
| ·单体AS在溶液中不是完全无结构的 | 第28-29页 |
| ·实验方法和参数 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-31页 |
| ·AS在低盐与高盐溶液中存在不同构象 | 第29-30页 |
| ·通过溶剂诱导的同位素位移鉴别结构差异 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 4 含有机溶剂体系下AS的结构研究 | 第33-42页 |
| ·有机溶剂的加入能够模拟生物膜环境 | 第33-34页 |
| ·氟谱对环境十分敏感是研究结构变化很好的探针 | 第34页 |
| ·实验方法和参数 | 第34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-40页 |
| ·圆二色光谱实验 | 第34-35页 |
| ·~1H-~(15)N HSQC实验结果 | 第35-39页 |
| ·一维~(19)F谱实验 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 5 硕士期间开展的其他工作 | 第42-56页 |
| ·对AS寡聚物的研究 | 第42-49页 |
| ·AS寡聚物更可能是帕金森病的病因 | 第42-44页 |
| ·~(14)N四极裂分能够反映结构变化 | 第44-46页 |
| ·实验方法 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-49页 |
| ·硒元素细胞内代谢初步研究 | 第49-52页 |
| ·硒元素在细胞中的代谢 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50页 |
| ·实验结果和讨论 | 第50-52页 |
| ·~(14)N-四极耦合常数测定序列调试 | 第52-56页 |
| ·组氨酸有多种存在形式 | 第52-53页 |
| ·~(14)N四极耦合常数有多种测定方法 | 第53-54页 |
| ·样品制备及实验方法 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 附录A 圆二色光谱操作 | 第64页 |
| 附录B 荧光监测AS纤维化过程 | 第64-65页 |
| 附录C BCA检测蛋白质浓度 | 第65页 |
| 附录D 蛋白纯化时所用缓冲溶液配方 | 第65页 |
| 裂菌缓冲液(lysis buffer) | 第65页 |
| 阴离子交换柱(Source Q) | 第65页 |
| S100分子筛 | 第65页 |
| 附录E 所用培养基及蛋白和核酸电泳胶配方 | 第65-68页 |
| 常规培养基配方 | 第65-66页 |
| SDS-PAGE浓缩胶和分离胶配方 | 第66-68页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第68页 |
