| 致谢 | 第1-14页 |
| 摘要 | 第14-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| 1 河南小麦生产现状与常见自然灾害防御 | 第17-20页 |
| ·河南小麦干旱灾害及其防御措施 | 第17页 |
| ·河南小麦冻害灾害及其防御措施 | 第17-18页 |
| ·植物抗旱基因工程研究进展 | 第18-19页 |
| ·植物抗旱相关基因研究进展及其调控途径 | 第18-19页 |
| ·植物抗冻基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| ·植物抗冻相关基因研究进展及其调控途径 | 第20页 |
| 2 转录因子简介 | 第20-22页 |
| ·转录因子功能结构域 | 第21-22页 |
| 3 BTF3 转录因子基因研究进展 | 第22-23页 |
| ·动物和微生物 BTF3 基因研究现状 | 第22页 |
| ·高等植物 BTF3 基因研究现状 | 第22-23页 |
| 4 VIGS 及其应用 | 第23-25页 |
| ·RNAi 及其作用机理 | 第23页 |
| ·VIGS 载体的发展 | 第23-24页 |
| ·VIGS 载体在植物基因功能研究中的应用 | 第24-25页 |
| ·VIGS 技术的优缺点 | 第25页 |
| 5 研究目的、意义、内容与技术路线 | 第25-27页 |
| ·研究目的与意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| ·技术路线 | 第27页 |
| 参考文献 | 第27-35页 |
| 第二章 小麦 TaBTF3 基因的克隆与分子特性研究 | 第35-54页 |
| 摘要 | 第35-36页 |
| Abstract | 第36页 |
| 1 引言 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-43页 |
| ·植物材料及其培养方法 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·植物材料培养方法与胁迫诱导 | 第37页 |
| ·菌株与克隆载体 | 第37页 |
| ·工具酶和主要化学试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基及溶液 | 第38页 |
| ·主要设备仪器 | 第38-39页 |
| ·基因全长 cDNA 序列和基因组 DNA 序列的克隆 | 第39-40页 |
| ·Total RNA 提取、纯化和检测 | 第39页 |
| ·Total RNA 提取 | 第39页 |
| ·PCR 鉴定 gDNA | 第39页 |
| ·RT-PCR 合成 cDNA 第一链 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR | 第40页 |
| ·小麦基因组 DNA 的提取 | 第40页 |
| ·引物序列 | 第40-41页 |
| ·RACE | 第41页 |
| ·PCR 产物的克隆、鉴定与转化 | 第41-43页 |
| ·PCR 反应 | 第41页 |
| ·电泳检测 PCR 产物 | 第41-42页 |
| ·PCR 产物或 DNA 片段纯化回收 | 第42页 |
| ·连接反应与转化 | 第42页 |
| ·质粒抽提 | 第42页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第42-43页 |
| ·菌落/菌液 PCR 初步检测 | 第42页 |
| ·质粒 PCR 与测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·TaBTF3 的克隆与序列分析 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-51页 |
| ·TaBTF3 RACE 克隆结果与分析 | 第43-45页 |
| ·TaBTF3 ORF、DNA 序列全长的扩增与分析 | 第45-47页 |
| ·TaBTF3 同源序列比对和系统进化树的构建 | 第47-48页 |
| ·TaBTF3 组织表达特性及其诱导表达特性研究 | 第48-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-54页 |
| 第三章 小麦 TaBTF3 基因拷贝数鉴定与亚细胞定位 | 第54-66页 |
| 摘要 | 第54页 |
| Abstract | 第54页 |
| 1 引言 | 第54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-59页 |
| ·植物材料及其培养方法 | 第54-55页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·植物材料培养 | 第54-55页 |
| ·亚细胞定位主要材料、试剂和溶液 | 第55-56页 |
| ·载体和菌株 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要溶液配制 | 第55-56页 |
| ·Southern 杂交主要材料、试剂和溶液 | 第56页 |
| ·主要试剂耗材 | 第56页 |
| ·主要溶液配制 | 第56页 |
| ·引物序列 | 第56-57页 |
| ·亚细胞定位实验方法 | 第57-58页 |
| ·TaBTF3-pJIT163-hGFP 重组载体的构建 | 第57页 |
| ·TaBTF3 基因 ORF 片段的克隆 | 第57页 |
| ·TaBTF3-pJIT163-hGFP 重组载体的构建、转化与筛选 | 第57页 |
| ·拟南芥原生质体的分离与转化 | 第57-58页 |
| ·Southern 杂交实验方法 | 第58-59页 |
| ·杂交探针的制备、纯化 | 第58页 |
| ·地高辛标记杂交探针 | 第58页 |
| ·基因组 DNA 酶切 | 第58页 |
| ·转膜 | 第58页 |
| ·杂交 | 第58页 |
| ·洗膜与显影 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-64页 |
| ·TaBTF3 亚细胞定位结果与分析 | 第59-61页 |
| ·TaBTF3 亚细胞定位目的基因片段克隆结果 | 第59页 |
| ·TaBTF3-pJIT163-hGFP 重组载体构建结果与分析 | 第59-60页 |
| ·TaBTF3 亚细胞定位结果与分析 | 第60-61页 |
| ·TaBTF3 Southern 杂交结果与分析 | 第61-64页 |
| ·Southern 杂交探针序列信息及其扩增结果 | 第61-62页 |
| ·小麦基因组 DNA 检测结果 | 第62页 |
| ·地高辛标记探针结果 | 第62-63页 |
| ·小麦基因组 DNA 酶切结果检测 | 第63页 |
| ·Southern 杂交结果 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-66页 |
| 第四章 小麦BSMV-VIGS技术体系的建立 | 第66-84页 |
| 摘要 | 第66页 |
| Abstract | 第66页 |
| 1 引言 | 第66-67页 |
| 2 材料与方法 | 第67-71页 |
| ·植物材料及其培养方法 | 第67页 |
| ·菌株与质粒 | 第67页 |
| ·工具酶和主要化学试剂 | 第67页 |
| ·主要溶液 | 第67-68页 |
| ·引物序列 | 第68页 |
| ·建立 BSMV-VIGS 技术体系的方法 | 第68-71页 |
| ·TaPDS 引物设计要求 | 第68-69页 |
| ·构建 BSMV-TaPDS 重组载体 | 第69页 |
| ·TaPDS 目的基因片段的克隆 | 第69页 |
| ·BSMV-γ: TaPDS 重组载体的构建、转化与筛选 | 第69页 |
| ·BSMV 载体相关质粒提取 | 第69页 |
| ·BSMV 载体线性化 | 第69页 |
| ·体外转录生产病毒 | 第69-70页 |
| ·小麦材料的准备与接种 | 第70-71页 |
| ·病毒接种混合液的制备 | 第70页 |
| ·小麦材料的准备与接种 | 第70-71页 |
| ·表型分析与转录本水平检测 | 第71页 |
| ·生理指标检测 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-80页 |
| ·TaPDS 目的基因片段克隆结果分析 | 第71-72页 |
| ·BSMV 载体质粒提取结果检测 | 第72-73页 |
| ·BSMV-γ:GFP 质粒单酶切结果分析 | 第73页 |
| ·BSMV-γ: TaPDS 重组载体鉴定结果分析 | 第73-74页 |
| ·BSMV-γ: TaPDS-JM109 菌液 PCR 检测结果 | 第73-74页 |
| ·BSMV-γ: TaPDS 阳性重组质粒酶切鉴定结果 | 第74页 |
| ·BSMV 载体线性化结果与分析 | 第74-75页 |
| ·体外转录生产 BSMV 病毒产物检测结果 | 第75页 |
| ·病毒接种后的表型变化与结果分析 | 第75-79页 |
| ·TaPDS 转录本水平表达量变化检测结果 | 第79页 |
| ·TaPDS-VIGS 植株 MDA 含量与叶绿素含量测定结果 | 第79页 |
| ·TaPDS-VIGS 成功率统计结果 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 第五章 小麦 TaBTF3-VIGS 植株的获得与鉴定 | 第84-97页 |
| 摘要 | 第84页 |
| Abstract | 第84页 |
| 1 引言 | 第84-85页 |
| 2 材料与方法 | 第85-87页 |
| ·植物材料及其培养方法 | 第85页 |
| ·菌株与质粒 | 第85页 |
| ·工具酶和主要化学试剂 | 第85页 |
| ·主要溶液 | 第85页 |
| ·引物序列 | 第85页 |
| ·TaBTF3-VIGS 植株的构建 | 第85-87页 |
| ·TaBTF3 引物设计 | 第85页 |
| ·构建 BSMV-TaBTF3 重组载体 | 第85-86页 |
| ·TaBTF3 目的基因片段的克隆 | 第85页 |
| ·BSMV-γ: TaBTF3 重组载体的构建、转化与筛选 | 第85-86页 |
| ·BSMV 载体相关质粒提取 | 第86页 |
| ·BSMV 载体线性化 | 第86页 |
| ·体外转录生产病毒 | 第86页 |
| ·小麦材料的准备与接种 | 第86页 |
| ·表型观察与转录本水平检测 | 第86页 |
| ·表型观察 | 第86页 |
| ·转录本水平检测 | 第86页 |
| ·生理指标检测 | 第86-87页 |
| ·生物量积累检测 | 第86-87页 |
| ·激光共聚焦扫描（confocal）检测 H2O2含量 | 第87页 |
| 3 结果与分析 | 第87-95页 |
| ·TaBTF3 目的基因片段克隆结果分析 | 第87页 |
| ·BSMV-γ: TaBTF3 重组载体鉴定结果分析 | 第87-88页 |
| ·BSMV-γ: TaBTF3-JM109 菌液 PCR 检测结果 | 第87-88页 |
| ·BSMV-γ: TaBTF3 阳性重组质粒酶切鉴定结果 | 第88页 |
| ·BSMV-γ: TaBTF3 载体线性化结果与分析 | 第88-89页 |
| ·体外转录生产 BSMV 病毒产物检测结果 | 第89页 |
| ·病毒接种后的表型观察记录结果分析 | 第89-90页 |
| ·TaBTF3 转录本水平表达量变化检测结果 | 第90-92页 |
| ·BSMV-GFP 植株 GFP 表达检测结果 | 第92页 |
| ·TaBTF3-VIGS 植株 MDA 含量与叶绿素含量测定结果 | 第92页 |
| ·H_2O2_含量检测 | 第92-93页 |
| ·生物量积累比较 | 第93-95页 |
| 4 讨论 | 第95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 第六章 TaBTF3 沉默对线粒体、叶绿体和叶肉细胞生长发育的影响 | 第97-103页 |
| 摘要 | 第97页 |
| Abstract | 第97页 |
| 1 引言 | 第97页 |
| 2 材料与方法 | 第97-99页 |
| ·植物材料及其培养方法 | 第97-98页 |
| ·主要化学试剂 | 第98页 |
| ·主要溶液 | 第98页 |
| ·荧光定量 PCR | 第98页 |
| ·Total RNA 提取 | 第98页 |
| ·合成 cDNA 第一链 | 第98页 |
| ·Real-time PCR 反应 | 第98页 |
| ·引物序列 | 第98-99页 |
| ·主要实验用具 | 第99页 |
| ·主要设备仪器 | 第99页 |
| ·石蜡切片方法步骤 | 第99页 |
| 3 结果与分析 | 第99-101页 |
| ·叶绿体、线粒体相关基因定量 PCR 检测结果 | 第99-100页 |
| ·BSMV-VIGS 植株叶片显微观察结果 | 第100-101页 |
| 4 讨论 | 第101页 |
| 参考文献 | 第101-103页 |
| 第七章 TaBTF3沉默降低小麦植株非生物胁迫耐受性 | 第103-115页 |
| 摘要 | 第103页 |
| Abstract | 第103页 |
| 1 引言 | 第103-104页 |
| 2 材料与方法 | 第104-107页 |
| ·植物材料与培养方法 | 第104页 |
| ·方法 | 第104-107页 |
| ·植物体内游离脯氨酸含量的测定 | 第104-105页 |
| ·脯氨酸标准曲线的制作 | 第104页 |
| ·样品中脯氨酸含量的测定 | 第104-105页 |
| ·相对电导率测定 | 第105页 |
| ·实验步骤 | 第105页 |
| ·离体叶片失水率、相对含水量测定方法 | 第105页 |
| ·逆境胁迫处理方法 | 第105-106页 |
| ·自然失水干旱胁迫处理 | 第105-106页 |
| ·冻害胁迫处理 | 第106页 |
| ·逆境相关基因荧光定量 PCR 检测 | 第106-107页 |
| ·定量 PCR 实验方法 | 第106页 |
| ·引物序列 | 第106-107页 |
| 3 结果与分析 | 第107-112页 |
| ·逆境相关基因定量 PCR 检测结果 | 第107页 |
| ·冻害处理过程中游离脯氨酸含量与相对电导率测定结果 | 第107-108页 |
| ·TaBTF3-VIGS 植株冻害胁迫耐受性检测结果 | 第108-109页 |
| ·离体叶片相对含水量与失水率测定结果 | 第109-110页 |
| ·TaBTF3-VIGS 植株干旱胁迫耐受性检测结果 | 第110-112页 |
| 4 讨论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-115页 |
| 第八章 结论与展望 | 第115-117页 |
| 1 主要结论 | 第115页 |
| ·本文首次从小麦中克隆到 BTF3 类转录因子基因 TaBTF3 | 第115页 |
| ·成功建立了系统性、稳定沉默的 BSMV-VIGS 技术体系 | 第115页 |
| ·沉默 TaBTF3 影响线粒体、叶绿体和叶肉细胞的生长发育 | 第115页 |
| ·沉默 TaBTF3 降低了小麦植株对非生物胁迫的耐受能力 | 第115页 |
| 2 主要创新点 | 第115-116页 |
| 3 后续工作 | 第116-117页 |
| 附注：已发表论文 | 第117页 |
