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棉花转录因子GhRAV和GhMYB功能分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-29页
   ·种子的休眠与萌发第13-20页
     ·外在因素对种子萌发的影响第13-15页
       ·温度对种子萌发的影响第13-14页
       ·光照对种子萌发的影响第14页
       ·水分对种子萌发的影响第14页
       ·氧气对萌发的影响第14-15页
       ·盐浓度对种子萌发的影响第15页
     ·植物激素对种子萌发的影响第15-20页
       ·GA 对种子萌发的影响第15-16页
       ·ABA 对种子萌发的影响第16-19页
       ·其他植物激素对种子萌发的影响第19-20页
   ·转录因子第20-28页
     ·转录因子的 DNA 结合结构域第21页
     ·转录因子的转录调控结构域第21-22页
     ·转录因子的分类第22-28页
       ·SANT/MYB 转录因子的结构特征和功能第23-24页
       ·AP2/ERF 转录因子的鉴定和特征第24页
       ·AP2/ERF 转录因子家族的分类第24页
       ·AP2/ERF 转录因子家族的结构域的特征第24-25页
       ·AP2 亚家族的功能第25-26页
       ·DREB 和 ERF 亚家族的功能第26-27页
       ·RAV 亚家族的功能第27-28页
   ·本课题的目的和意义第28-29页
2 材料与方法第29-44页
   ·实验材料第29-30页
     ·植物材料第29页
     ·菌株与质粒第29页
     ·酶与各种生化试剂第29页
     ·引物第29-30页
   ·实验方法第30-44页
     ·RNA 的提取第30-31页
       ·利用 TRIzol 法提取 RNA第30-31页
       ·利用通用植物总 RNA 提取试剂盒(离心柱型)提取 RNA第31页
     ·RNA 中基因组 DNA 的去除第31-32页
     ·RNA 反转录第32页
     ·植物基因组的提取与纯化第32-33页
       ·拟南芥基因组 DNA 的 CTAB 法提取(小量法)第32页
       ·植物基因组的纯化第32-33页
     ·载体构建第33-35页
       ·目的 DNA 片段的获得第33页
       ·DNA 片段的回收(试剂盒法)第33-34页
       ·平末端加尾第34页
       ·连接反应第34页
       ·酶切和回收第34-35页
       ·酶切片段连接到 pBI121 表达载体第35页
     ·大肠杆菌(E. Coli)感受态细胞的制备和外源重组质粒的转化第35-36页
       ·大肠杆菌(E. Coli)感受态细胞的制备第35页
       ·大肠杆菌(E. Coli)细胞对外源重组质粒的转化第35-36页
       ·阳性重组质粒的菌液 PCR 方法鉴定第36页
     ·提取环状的质粒 DNA 的分子第36-37页
       ·小量碱法提取环状的质粒第36-37页
       ·大量法提取环状的质粒第37页
     ·植物高效表达载体 pBI121 所介导的遗传转化第37-38页
       ·根癌农杆菌 GV3101 感受态细胞的制备第37页
       ·冻融法转化农杆菌 GV3101第37-38页
     ·农杆菌的培养第38页
     ·农杆菌介导的拟南芥稳定转化第38页
     ·转化洋葱表皮细胞观察 GFP 定位第38-39页
     ·实时定量反转录 PCR第39-40页
       ·定量反转录 PCR 引物的设计第39页
       ·qRT-PCR 反应条件第39-40页
     ·植物蛋白的提取第40页
     ·Western Blot 方法第40-43页
       ·蛋白质浓度检测第40-41页
       ·蛋白质凝胶电泳第41页
       ·半干法蛋白转移第41-42页
       ·免疫发光法检测蛋白含量第42-43页
     ·进化树的获得第43-44页
       ·使用 Clustal 进行序列比对第43页
       ·Mega4 构建系统发生树的方法第43-44页
3 结果与分析第44-58页
   ·EST 序列的获得第44页
   ·DW497477 和 TA42288_3635 全长序列的获得第44-45页
   ·GhRAV 的功能分析第45-55页
     ·GhRAV 氨基酸序列分析第45-46页
     ·GhRAV 蛋白的亚细胞定位第46-47页
     ·GhRAV 转基因拟南芥的功能分析第47-53页
       ·GhRAV 超表达拟南芥的获得第47-48页
       ·GhRAV 超表达株系对盐胁迫不敏感第48-50页
       ·GhRAV 超表达株系对渗透胁迫不敏感第50-51页
       ·ABA 介导了 GhRAV 超表达株系对盐胁迫和渗透胁迫的不敏感第51-53页
     ·GhRAV 超表达影响了 ABA 介导的盐和渗透胁迫的 ABA 信号第53-55页
   ·GhMYB 的功能分析第55-58页
     ·GhMYB 超表达拟南芥株系的获得第55-56页
     ·GhMYB 超表达株系对盐和渗透胁迫不敏感第56-58页
4 讨论第58-60页
5 结论第60-61页
参考文献第61-69页
致谢第69页

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