| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-21页 |
| ·副猪嗜血杆菌研究进展 | 第13-15页 |
| ·副猪嗜血杆菌简介 | 第13-14页 |
| ·副猪嗜血杆菌毒力因子研究进展 | 第14-15页 |
| ·自转运蛋白研究进展 | 第15-18页 |
| ·自转运蛋白结构和功能 | 第15-17页 |
| ·副猪嗜血杆菌的自转运蛋白 | 第17-18页 |
| ·血清抗性研究进展 | 第18-21页 |
| ·血清抗性机制研究进展 | 第18-20页 |
| ·HPS血清抗性研究进展 | 第20-21页 |
| 2 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-41页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·菌株,质粒载体和健康猪血清 | 第22页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第22-23页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-41页 |
| ·副猪嗜血杆菌的培养及基因组的提取 | 第27-28页 |
| ·基因克隆程序 | 第28-30页 |
| ·蛋白的原核表达、纯化及SDS-PAGE检测 | 第30-31页 |
| ·健康猪血清的制备 | 第31-32页 |
| ·电转化法筛选at2基因缺失株 | 第32-34页 |
| ·结合转移法筛选at2基因缺失株 | 第34-35页 |
| ·自然转化法筛选at2基因缺失株 | 第35-36页 |
| ·at2基因缺失株的鉴定 | 第36-39页 |
| ·生长曲线绘制 | 第39页 |
| ·血清杀菌试验 | 第39-41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-57页 |
| ·电转化法筛选at2-pd基因缺失株 | 第41-44页 |
| ·重组质粒pSHK3~(TS)-at2-pd-UD的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒电转入SH0165中 | 第42页 |
| ·用重组温敏型质粒筛选at2-pd基因缺失突变株 | 第42-44页 |
| ·HS1073体外加入AT2-PD蛋白进行血清杀菌试验 | 第44-47页 |
| ·SH0165和HS1073的血清抗性 | 第44页 |
| ·AT2-PD蛋白的原核表达、纯化及SDS-PAGE检测 | 第44-45页 |
| ·确定血清的最佳杀菌浓度 | 第45-46页 |
| ·确定试验用AT2-PD蛋白的最适浓度 | 第46页 |
| ·AT2-PD蛋白对HS1073菌株血清抗性有提高作用 | 第46-47页 |
| ·其他方法筛选at2基因缺失株 | 第47-51页 |
| ·接合转移法筛选 | 第47-49页 |
| ·自然转化法筛选 | 第49-51页 |
| ·基因缺失株的鉴定 | 第51-55页 |
| ·PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·缺失株at2-pd基因测序 | 第52-53页 |
| ·Western blot鉴定 | 第53-54页 |
| ·Southern blot鉴定 | 第54-55页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第55-56页 |
| ·缺失株和野生株进行血清杀菌试验 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-60页 |
| ·at2基因缺失株的筛选 | 第57-58页 |
| ·电转化法温敏质粒筛选 | 第57页 |
| ·接合转移法筛选 | 第57-58页 |
| ·自然转化法筛选 | 第58页 |
| ·体外加入AT2-PD蛋白进行血清杀菌试验 | 第58-59页 |
| ·缺失株和野生株进行血清杀菌试验 | 第59-60页 |
| 6 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
