| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 一、综述 | 第16-31页 |
| 1. 猪流行性腹泻的流行与危害 | 第16-18页 |
| 2 PEDV的分类和结构特征 | 第18-22页 |
| ·病毒的分类及形态特征 | 第18-19页 |
| ·病毒的理化特性 | 第19页 |
| ·病毒的基因组结构和蛋白 | 第19-21页 |
| ·PEDV的基因分型和流行特点 | 第21-22页 |
| 3 病毒的细胞培养特性 | 第22-23页 |
| 4 PEDV的病理变化及致病机理 | 第23-24页 |
| 5 PED诊断方法研究进展 | 第24-29页 |
| ·病毒的分离与鉴定法 | 第24页 |
| ·免疫电镜法(IEM) | 第24页 |
| ·原位杂交技术(ISH) | 第24-25页 |
| ·免疫荧光法 | 第25页 |
| ·微量血清中和试验 | 第25页 |
| ·胶体金抗体检测技术 | 第25页 |
| ·RT-PCR法 | 第25-28页 |
| ·ELISA法 | 第28-29页 |
| 6 PEDV的控制 | 第29-30页 |
| 7 研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 第一章 广西猪流行性腹泻病毒分子流行病学调查 | 第31-50页 |
| 1 实验材料及主要试剂 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第31-32页 |
| 2 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 3 方法与步骤 | 第33-38页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·粪便样品的处理 | 第33-34页 |
| ·病毒总RNA提取 | 第34页 |
| ·反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第34-35页 |
| ·电泳 | 第35页 |
| ·基因克隆 | 第35-36页 |
| ·样品统计分析 | 第36-37页 |
| ·序列比对及进化树构建 | 第37-38页 |
| 4 结果 | 第38-47页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第38-39页 |
| ·广西猪流行性腹泻病毒流行情况 | 第39-47页 |
| 5 分析与讨论 | 第47-50页 |
| ·PEDV在广西流行情况分析 | 第47页 |
| ·本地流行毒株M基因分析 | 第47-48页 |
| ·本地流行毒株ORF3基因分析 | 第48-50页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒分离鉴定和序列分析 | 第50-73页 |
| 1 材料与试剂 | 第50-52页 |
| ·病料 | 第50页 |
| ·菌种、实验动物、细胞和血清 | 第50页 |
| ·分子生物学试剂 | 第50-51页 |
| ·主要仪器与设备 | 第51页 |
| ·主要试剂配制 | 第51-52页 |
| 2 方法与步骤 | 第52-57页 |
| ·样品的处理 | 第52页 |
| ·引物设计 | 第52-53页 |
| ·病料中病毒RNA的提取及RT-PCR | 第53-54页 |
| ·VERO细胞培养 | 第54页 |
| ·VERO细胞胰酶适应性研究 | 第54页 |
| ·病毒在VERO细胞增殖培养 | 第54页 |
| ·病毒鉴定 | 第54-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-68页 |
| ·病毒分离结果 | 第57页 |
| ·RT-PCR鉴定结果 | 第57-58页 |
| ·PEDV-LB株全基因克隆及序列分析结果 | 第58-65页 |
| ·接种细胞前后ORF3基因的比较结果 | 第65页 |
| ·VERO细胞胰酶适应性结果 | 第65页 |
| ·病毒的细胞培养结果 | 第65-66页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第66-67页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第67页 |
| ·TCID_(50)测定结果 | 第67-68页 |
| 4 分析与讨论 | 第68-73页 |
| ·病毒分离培养分析 | 第68-69页 |
| ·PEDV-LB株的全基因克隆分析 | 第69-70页 |
| ·PEDV-LB株主要结构基因的分析 | 第70-72页 |
| ·关于PEDV-LB株的鉴定 | 第72-73页 |
| 第三章 猪流行性腹泻病毒N基因部分序列的原核表达及间接ELISA方法的初步建立 | 第73-102页 |
| 1 实验材料 | 第73-75页 |
| ·菌种、质粒及抗体 | 第73页 |
| ·主要试剂及配制 | 第73-75页 |
| ·主要的仪器设备 | 第75页 |
| 2 方法与步骤 | 第75-82页 |
| ·引物设计 | 第75-76页 |
| ·重组质粒的制备和酶切鉴定 | 第76页 |
| ·重组原核表达质粒的制备和酶切鉴定 | 第76-77页 |
| ·PEDV N基因片段的原核表达 | 第77-79页 |
| ·N蛋白鼠源抗血清的制备 | 第79页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第79-82页 |
| 3 实验结果 | 第82-97页 |
| ·N基因的PCR克隆与酶切鉴定 | 第82页 |
| ·DNAStar-Protean软件分析 | 第82-83页 |
| ·目的基因的克隆及酶切鉴定 | 第83-84页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第84页 |
| ·重组菌的诱导表达和SDS-PAGE | 第84-85页 |
| ·目的蛋白表达形式的鉴定结果 | 第85-86页 |
| ·纯化后NB蛋白的SDS-PAGE | 第86页 |
| ·重组蛋白的鉴定 | 第86-88页 |
| ·纯化后重组蛋白ORF2c浓度的测定 | 第88页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第88-97页 |
| 4 分析与讨论 | 第97-102页 |
| ·关于重组N蛋白的原核表达与纯化 | 第98-99页 |
| ·关于重组蛋白的免疫原性 | 第99页 |
| ·关于间接ELISA诊断方法的建立 | 第99-102页 |
| 全文总结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第113页 |