| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 常用缩略词表 | 第10-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-31页 |
| 第一章 疱疹病毒gD基因研究进展 | 第17-31页 |
| 1 疱疹病毒概述 | 第17-24页 |
| ·疱疹病毒分类 | 第17页 |
| ·疱疹病毒形态结构 | 第17-19页 |
| ·疱疹病毒基因组结构 | 第19-21页 |
| ·疱疹病毒基因转录和蛋白表达调节 | 第21-23页 |
| ·疱疹病毒主要结构蛋白 | 第23-24页 |
| 2 疱疹病毒gD基因研究进展 | 第24-31页 |
| ·疱疹病毒gD基因在基因组中定位及复制类型 | 第24-25页 |
| ·疱疹病毒gD蛋白结构 | 第25-26页 |
| ·疱疹病毒gD蛋白功能 | 第26-29页 |
| ·疱疹病毒gD蛋白应用展望 | 第29-31页 |
| 第二部分 试验研究 | 第31-108页 |
| 第二章 鸭瘟病毒gD基因克隆及生物信息学 | 第31-52页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·毒株和菌株 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-36页 |
| ·gD基因的发现 | 第33页 |
| ·gD基因的克隆和鉴定 | 第33-36页 |
| 3 结果 | 第36-49页 |
| ·gD基因的发现 | 第36页 |
| ·gD基因的克隆和鉴定结果 | 第36-38页 |
| ·gD基因的同源比对结果 | 第38-40页 |
| ·gD生物信息学分析结果 | 第40-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·DPV gD基因的发现 | 第49页 |
| ·DPV gD的结构预测 | 第49-50页 |
| ·gD的功能及研究意义 | 第50-52页 |
| 第三章 鸭瘟病毒gD基因胞外区原核表达、产物纯化及其抗体制备 | 第52-68页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| ·菌株/毒株/载体 | 第52页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要仪器 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-60页 |
| ·引物的设计与合成 | 第53-54页 |
| ·DPV-gD基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·DPV gD胞外区基因的克隆 | 第55页 |
| ·原核表达重组质粒pET32a-gD的构建 | 第55-56页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·gD胞外区蛋白的大量表达 | 第57-58页 |
| ·gD胞外区表达蛋白的纯化和复性-Ni-NTA亲和层析 | 第58页 |
| ·gD-His的Western Blot检测 | 第58-59页 |
| ·兔抗gD-His融合蛋白抗体的制备及IgG的提取和纯化 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-64页 |
| ·DPV基因的PCR扩增结果 | 第60页 |
| ·pGEM-T/gD克隆鉴定结果 | 第60-61页 |
| ·pGEM-T/gD的序列测定结果 | 第61页 |
| ·表达重组质粒pET32a-gD的鉴定结果 | 第61页 |
| ·pET32a-gD的诱导表达结果 | 第61-62页 |
| ·pET32a-gD表达蛋白在宿主菌中的分布结果 | 第62页 |
| ·pET32a-gD表达蛋白纯化结果 | 第62-63页 |
| ·pET32a-gD表达产物的结合活性检测结果 | 第63页 |
| ·兔抗DPV gD融合蛋白阳性血清的制备结果 | 第63-64页 |
| ·兔抗gD重组蛋白的ELISA抗体效价 | 第63-64页 |
| ·兔抗gD重组蛋白IgG的纯化结果 | 第64页 |
| 4 讨论 | 第64-68页 |
| ·DPV gD的表达载体的选择 | 第65页 |
| ·重组蛋白的表达形式 | 第65-66页 |
| ·DPVgD蛋白的原核表达 | 第66页 |
| ·兔抗gD重组蛋白IgG的制备和纯化 | 第66-68页 |
| 第四章 鸭瘟病毒gD基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的瞬时表达 | 第68-79页 |
| 1 材料 | 第68-69页 |
| ·毒株、菌株、细胞株 | 第68页 |
| ·实验动物 | 第68页 |
| ·主要试剂 | 第68-69页 |
| ·主要仪器 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-73页 |
| ·DPV病毒CHv株的增殖及基因组DNA的提取 | 第69页 |
| ·gD基因扩增 | 第69-71页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第71页 |
| ·真核表达载体转染 | 第71-72页 |
| ·真核表达载体在细胞内表达和检测 | 第72-73页 |
| 3 结果 | 第73-77页 |
| ·DPVgD全基因的获得 | 第73页 |
| ·含gD基因的真核表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·gD蛋白在COS-7细胞内的瞬时表达 | 第74-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| ·表达载体的选择 | 第77页 |
| ·gD功能及定位 | 第77-78页 |
| ·gD的检测 | 第78-79页 |
| 第五章 鸭瘟病毒gD基因的转录及表达分析及gD蛋白在宿主细胞中的亚细胞定位研究 | 第79-92页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| ·毒株、菌株 | 第79页 |
| ·实验动物 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79-80页 |
| ·主要仪器设备 | 第80页 |
| 2 实验方法 | 第80-84页 |
| ·鸭胚成纤维细胞的制备 | 第80页 |
| ·鸭瘟病毒gD基因的转录时相分析 | 第80-82页 |
| ·鸭瘟病毒gD基因的表达时相分析 | 第82-83页 |
| ·间接免疫荧光检测DPVgD亚细胞定位 | 第83-84页 |
| 3 结果 | 第84-88页 |
| ·鸭瘟病毒gD基因的转录时相 | 第84-86页 |
| ·DPV gD基因产物在宿主细胞中的表达时相 | 第86页 |
| ·间接免疫荧光检测DPV gD亚细胞定位动态监测结果 | 第86-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| ·病毒gD基因转录时相分析 | 第88-89页 |
| ·DPVgD表达时相分析 | 第89-90页 |
| ·gD蛋白宿主细胞中的定位研究 | 第90-92页 |
| 第六章 鸭瘟病毒gD胞外区表达蛋白作为包备抗原ELISA检测DPV抗体的研究和应用 | 第92-101页 |
| 1 材料 | 第92-93页 |
| ·毒株 | 第92页 |
| ·血清 | 第92页 |
| ·主要试剂 | 第92-93页 |
| ·ELISA试剂的配制 | 第93页 |
| ·主要仪器 | 第93页 |
| 2 方法 | 第93-94页 |
| ·DPV gD基因胞外区蛋白的获得与纯化 | 第93页 |
| ·DPV gD基因胞外区蛋白作为包被抗原间接ELISA方法的建立 | 第93-94页 |
| ·间接ELISA方法检测DPV抗体的应用 | 第94页 |
| 3 结果 | 第94-98页 |
| ·DPV gD表达蛋白间接ELISA方法的建立 | 第94-97页 |
| ·对临床样品的检测 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| ·ELISA方法在鸭瘟病毒检测中的应用 | 第98页 |
| ·建立在重组gD蛋白基础上的间接ELISA方法 | 第98-99页 |
| ·DPVgD-ELISA方法的优化 | 第99-101页 |
| 第七章 检测DPV gD基因PCR方法的建立与应用 | 第101-108页 |
| 1 材料 | 第101-102页 |
| 2 方法 | 第102-104页 |
| ·毒株DNA模板的提取 | 第102-103页 |
| ·PCR检测 | 第103-104页 |
| ·PCR灵敏性检验 | 第104页 |
| ·PCR特异性检验 | 第104页 |
| ·组织样品的检测 | 第104页 |
| 3 结果 | 第104-106页 |
| ·对DPV强毒CHv株及疫苗株DNA的检测结果 | 第104页 |
| ·PCR灵敏性试验 | 第104-105页 |
| ·PCR特异性试验 | 第105页 |
| ·组织病料的检测 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-108页 |
| ·PCR在DPV检测上的应用 | 第106-107页 |
| ·gDPCR的建立 | 第107-108页 |
| 第三部分 结论 | 第108-109页 |
| 第四部分 参考文献 | 第109-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附录 | 第124-128页 |
| 攻读学位期间发表的论著目录 | 第128页 |
