毕赤酵母生产重组蛋白A工艺研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献摘要 | 第11-34页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A | 第11-18页 |
| ·金黄色葡萄球菌蛋白A的发现 | 第11页 |
| ·SPA结构与功能 | 第11-14页 |
| ·SPA的应用价值 | 第14-16页 |
| ·SPA的大规模生产与纯化 | 第16-18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第18页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统菌株 | 第18-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统载体 | 第21-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母中外源基因的重组方式 | 第23-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统大规模发酵培养条件 | 第24-26页 |
| ·蛋白质纯化技术 | 第26-32页 |
| ·蛋白纯化策略 | 第27-28页 |
| ·决定纯化过程蛋白性质 | 第28-30页 |
| ·蛋白纯化关键技术 | 第30-32页 |
| ·重组蛋白分析与鉴定 | 第32页 |
| ·论文的研究内容、目标及意义 | 第32-34页 |
| 2 摇瓶中毕赤酵母表达rSPA条件优化 | 第34-42页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验试剂及器材 | 第34-36页 |
| ·主要试剂与材料 | 第34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34-35页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-37页 |
| ·重组毕赤酵母rGS115菌种活化 | 第36页 |
| ·rSPA摇瓶诱导表达条件的优化 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36-37页 |
| ·实验结果与讨论 | 第37-41页 |
| ·诱导温度对rSPA表达的影响 | 第37-38页 |
| ·诱导pH对rSPA表达的影响 | 第38-39页 |
| ·诱导剂浓度对rSPA表达的影响 | 第39-40页 |
| ·诱导时间对rSPA表达的影响 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 3 发酵罐中毕赤酵母表达rSPA条件优化 | 第42-59页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验试剂及器材 | 第42-44页 |
| ·主要试剂与材料 | 第42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-49页 |
| ·BCA法测定总蛋白浓度 | 第44页 |
| ·靛酚蓝比色法测定NH_4~+离子浓度 | 第44-46页 |
| ·外标法测定发酵液中甲醇浓度 | 第46页 |
| ·发酵种子活化 | 第46-47页 |
| ·rSPA发酵条件优化 | 第47-48页 |
| ·菌体死亡率测定 | 第48页 |
| ·蛋白样品IgG亲和活性检测 | 第48页 |
| ·蛋白样品Western Blot分析 | 第48-49页 |
| ·实验结果与讨论 | 第49-57页 |
| ·诱导起始菌体密度对rSPA发酵的影响 | 第49-50页 |
| ·诱导温度对rSPA发酵的影响 | 第50-51页 |
| ·诱导pH对rSPA发酵的影响 | 第51-54页 |
| ·诱导时间对rSPA表达的影响 | 第54页 |
| ·甲醇和NH_4~+浓度的检测 | 第54-56页 |
| ·蛋白样品IgG亲和活性检测 | 第56-57页 |
| ·蛋白样品Western Blot分析结果 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 4 rSPA分离纯化工艺研究 | 第59-74页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·实验试剂及器材 | 第59-60页 |
| ·主要试剂与材料 | 第59页 |
| ·主要实验仪器 | 第59-60页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·发酵液中色素的去除 | 第60-61页 |
| ·DEAE离子交换层析 | 第61-62页 |
| ·纯化后样品Western Blot检测 | 第62页 |
| ·高效液相色谱法检测纯化后样品纯度 | 第62-63页 |
| ·纯化后样品分子量测定 | 第63页 |
| ·实验结果与讨论 | 第63-72页 |
| ·发酵液中色素的去除 | 第63-66页 |
| ·DEAE离子交换层析 | 第66-70页 |
| ·纯化后样品Western Blot检测 | 第70页 |
| ·高效液相色谱法检测纯化后样品纯度 | 第70-71页 |
| ·纯化后样品分子量测定 | 第71-72页 |
| ·小结 | 第72-74页 |
| 结论与展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录A 基因重组蛋白A氨基酸序列 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
