| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-21页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-42页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒研究进展 | 第21-34页 |
| ·TGEV和TGE | 第21-23页 |
| ·TGEV致病机制 | 第23页 |
| ·TGEV诊断 | 第23-25页 |
| ·病毒分离和培养 | 第23-24页 |
| ·分子生物学检测 | 第24-25页 |
| ·防治 | 第25页 |
| ·TGEV疫苗研究进展 | 第25-29页 |
| ·人工感染强毒 | 第25-26页 |
| ·灭活苗 | 第26页 |
| ·弱毒疫苗毒株 | 第26页 |
| ·基因工程疫苗 | 第26-28页 |
| ·核酸疫苗 | 第28-29页 |
| ·TGEV 基因组 | 第29-34页 |
| ·TGEV基因组结构 | 第29页 |
| ·TGEV基因的复制与转录 | 第29-30页 |
| ·TGEV非结构蛋白基因 | 第30-31页 |
| ·TGEV S基因 | 第31-32页 |
| ·TGEV M基因 | 第32-33页 |
| ·TGEV N基因 | 第33页 |
| ·TGEV sM基因 | 第33-34页 |
| ·RNA干扰（RNA I ）研究进展 | 第34-42页 |
| ·RNAi的发现 | 第34-35页 |
| ·RNAi的机制 | 第35-37页 |
| ·RNAi的应用 | 第37-42页 |
| ·基因功能研究 | 第37-38页 |
| ·疾病治疗研究 | 第38-39页 |
| ·抗病毒感染研究 | 第39-42页 |
| 第二章 TGEV分离株S基因测序及其SHRNA表达载体的构建 | 第42-58页 |
| ·材料方法 | 第43-47页 |
| ·仪器和试剂 | 第43页 |
| ·TGEV分离株S基因测序 | 第43-46页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·细胞培养物病毒总RNA的提取 | 第44页 |
| ·First-Strand cDNA合成（RT） | 第44-45页 |
| ·PCR扩增First-Strand cDNA | 第45-46页 |
| ·产物电泳分析和测序 | 第46页 |
| ·TGEs-15iRNA的设计 | 第46页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·TGEV分离株S基因测序 | 第47-48页 |
| ·PCR产物电泳结果 | 第47-48页 |
| ·S基因测序结果 | 第48页 |
| ·TGEs-15iRNA的设计 | 第48-49页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·讨论 | 第52-56页 |
| ·TGEV分离株S基因测序 | 第52-53页 |
| ·TGEs-15iRNA的设计 | 第53-54页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-58页 |
| 第三章 SHRNA表达载体抗细胞内TGEV感染的研究 | 第58-72页 |
| ·材料方法 | 第59-65页 |
| ·仪器和试剂 | 第59-60页 |
| ·仪器和试剂 | 第59-60页 |
| ·试剂配制 | 第60页 |
| ·转染级shRNA表达质粒制备 | 第60-62页 |
| ·TGEs-1 复苏和毒价测定 | 第62页 |
| ·TGEs-1 复苏 | 第62页 |
| ·TGEs-1 CCID50测定 | 第62页 |
| ·shRNA表达质粒转染与TGEs-1 感染 | 第62-63页 |
| ·shRNA表达质粒转染ST细胞 | 第62-63页 |
| ·TGEs-1 感染ST细胞 | 第63页 |
| ·细胞毒性检测试验（MTS） | 第63页 |
| ·病毒RNA提取和定量RT-PCR检测（P1、P2、T） | 第63-65页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·病毒RNA提取 | 第63页 |
| ·First-Strand cDNA合成（RT） | 第63-64页 |
| ·PCR扩增First-Strand cDNA | 第64-65页 |
| ·结果 | 第65-69页 |
| ·干扰条件的优化 | 第65页 |
| ·shRNA表达载体对TGEs-1 感染细胞的保护 | 第65-68页 |
| ·CPE分析 | 第65-66页 |
| ·MTS试验 | 第66-68页 |
| ·ShRNA表达载体对病毒RNA合成的抑制 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第四章 SHRNA表达载体抗小型猪体内TGEV感染的研究 | 第72-86页 |
| ·材料方法 | 第72-76页 |
| ·仪器和试剂 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·TGEs-1 高免血清制备 | 第73页 |
| ·shRNA表达质粒大量制备 | 第73-74页 |
| ·shRNA表达质粒转染小型猪 | 第74-75页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第75页 |
| ·病理切片制作 | 第75页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-83页 |
| ·EGFP分析 | 第76-77页 |
| ·临床症状和组织病变分析 | 第77-80页 |
| ·IFA分析 | 第80-82页 |
| ·RT-PCR分析 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第五章 全文总结 | 第86-88页 |
| ·主要结论 | 第86页 |
| ·研究展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-106页 |
| 附录CCID50 计算（REED-MUENCH法） | 第106-107页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
