| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 基因组印记的研究进展 | 第12-22页 |
| ·基因组印记及其发现 | 第12-13页 |
| ·印记基因的基本特征 | 第13-14页 |
| ·印记基因成簇存在 | 第13页 |
| ·印记基因复制的不同步性 | 第13-14页 |
| ·印记基因的保守性与特异性 | 第14页 |
| ·印记基因中非编码RNA | 第14页 |
| ·印记基因的可逆性 | 第14页 |
| ·基因组印记的可能分子机制 | 第14-18页 |
| ·印记与甲基化 | 第15-17页 |
| ·甲基化作用 | 第15-16页 |
| ·印记与DNA甲基化 | 第16-17页 |
| ·印记与非编码RNA | 第17页 |
| ·印记与组蛋白修饰 | 第17-18页 |
| ·印记产生的几种假说 | 第18-20页 |
| ·营养冲突假说(GCH) | 第19页 |
| ·卵巢爆炸理论(OTH) | 第19页 |
| ·X染色体相关的性特异性选择理论(XSSH) | 第19-20页 |
| ·性别拮抗选择理论(SASH) | 第20页 |
| ·合子中的亲本冲突假说 | 第20页 |
| ·适应假说 | 第20页 |
| ·印记基因的验证方法 | 第20-22页 |
| ·单性发育的胚胎或单亲双体 | 第20-21页 |
| ·随机发现 | 第21页 |
| ·AMD法(allelic message display) | 第21页 |
| ·细胞融合 | 第21页 |
| ·生物信息学 | 第21页 |
| ·差异甲基化 | 第21页 |
| ·基因芯片 | 第21-22页 |
| 2 基因组印记的生物学意义 | 第22-23页 |
| ·与胚胎发育 | 第22页 |
| ·与疾病 | 第22页 |
| ·与动物克隆 | 第22页 |
| ·与家畜遗传育种 | 第22-23页 |
| 3 基因启动子的研究 | 第23页 |
| ·启动子概念 | 第23页 |
| ·启动子缺失分析 | 第23页 |
| 4 MEST基因的研究现状 | 第23-24页 |
| 5 研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-36页 |
| 1 材料 | 第26-30页 |
| ·血液及组织样品 | 第26页 |
| ·载体和菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26-28页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第28-29页 |
| ·主要试剂、试剂盒及培养基 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·常用的生物信息学网站或分析软件 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的制备 | 第30-31页 |
| ·总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·总RNA的质量检测 | 第31页 |
| ·cDNA的制备 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·PCR及PCR-RFLP分析(见表) | 第32页 |
| ·PCR产物的克隆检测 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32-33页 |
| ·纯化的PCR产物克隆检测 | 第33页 |
| ·印记分析 | 第33页 |
| ·关联分析 | 第33页 |
| ·启动子功能分析 | 第33-36页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·目的片段的双酶切与连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的原核表达 | 第33-34页 |
| ·质粒抽提及双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·细胞培养与转染 | 第34-36页 |
| ·细胞培养与转染 | 第34页 |
| ·荧光素酶相对活性测定与分析 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-58页 |
| 1 猪基因组DNA、总RNA的提取、cDNA的制备及检测 | 第36-37页 |
| ·猪基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·总RNA的提取 | 第36-37页 |
| ·cDNA的制备及检测 | 第37页 |
| 2 猪MEST基因的分离、序列分析及基因染色体定位 | 第37-43页 |
| ·猪MEST基因的克隆、测序 | 第37-38页 |
| ·猪MEST基因的序列分析 | 第38-42页 |
| ·开放阅读框分析 | 第38页 |
| ·蛋白质序列的基本分析 | 第38页 |
| ·信号肽预测 | 第38-39页 |
| ·功能结构域分析 | 第39页 |
| ·保守结构域分析 | 第39-40页 |
| ·同源性分析 | 第40页 |
| ·PROSITE motif、磷酸化位点及二硫键分析 | 第40-41页 |
| ·跨膜区分析及亚细胞定位 | 第41-42页 |
| ·二级结构预测 | 第42页 |
| ·猪MEST基因的染色体定位 | 第42-43页 |
| 3 猪MEST基因的印记鉴定及表达分析 | 第43-53页 |
| ·猪MEST基因的印记鉴定 | 第43-47页 |
| ·外显子SNP的检测和杂合子个体的筛选 | 第43-44页 |
| ·猪MEST基因的印记分析 | 第44-47页 |
| ·LM30和ML30 MEST基因的印记表达 | 第44-45页 |
| ·LM65和ML65 MEST基因的印记表达 | 第45-46页 |
| ·LM100和ML100 MEST基因的印记表达 | 第46-47页 |
| ·猪MEST基因的组织表达谱分析 | 第47-49页 |
| ·LM65和ML65的组织表达谱分析 | 第47-48页 |
| ·LM100和ML100的组织表达谱分析 | 第48页 |
| ·梅山中MEST基因的组织表达谱分析 | 第48-49页 |
| ·猪MEST基因G133A位点与性状的关联分析 | 第49-53页 |
| ·猪MEST基因G133A位点分型方法的建立 | 第49页 |
| ·猪MEST基因G133A位点在不同品种猪群中的基因型及基因频率 | 第49页 |
| ·猪MEST基因G133A位点与猪胴体、肉质性状的关联分析 | 第49-50页 |
| ·猪MEST基因G133A位点与猪繁殖性状的关联分析 | 第50-53页 |
| 4 猪MEST基因启动子的克隆、生物信息学及功能的初步分析 | 第53-58页 |
| ·猪MEST基因5’侧翼序列的获得 | 第53-54页 |
| ·生物信息学预测MEST基因核心启动子及转录因子结合位点 | 第54-56页 |
| ·猪MEST基因启动子区真核表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·猪MEST基因启动子重组质粒的活性测定与分析 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-62页 |
| 1 基因印记的分析方法 | 第58-59页 |
| ·基于“表达的SNP”的分析方法 | 第58页 |
| ·应用品种间正反交模型 | 第58-59页 |
| 2 MEST蛋白的生物信息学分析 | 第59页 |
| 3 候选印记基因的印记状态 | 第59-60页 |
| 4 候选印记基因的组织表达谱 | 第60页 |
| 5 MEST与营养冲突假说 | 第60页 |
| 6 印记基因在动物遗传育种中的应用 | 第60-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
