| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 1 引言 | 第13-21页 |
| ·肝癌治疗现状 | 第13页 |
| ·肝癌基因治疗进展 | 第13-19页 |
| ·高效载体的选用 | 第14-17页 |
| ·有效治疗基因的选择 | 第17-19页 |
| ·本研究课题的来源和主要研究内容 | 第19-21页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·实验流程 | 第20-21页 |
| 2. 实验材料 | 第21-26页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·细胞株 | 第21-22页 |
| ·实验病毒 | 第22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22-24页 |
| ·主要溶液的配制 | 第24-26页 |
| 3. 实验方法 | 第26-52页 |
| ·目的基因的扩增和回收 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第26页 |
| ·目的片段的回收 | 第26-27页 |
| ·载体PMD-18T-cppSOCS1 的构建 | 第27-29页 |
| ·目的片段与载体的连接转化 | 第27-28页 |
| ·正确克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·中间载体PBS-cppSOCS1 的构建 | 第29-31页 |
| ·目的片段的获得 | 第29页 |
| ·载体PBS 的处理 | 第29-30页 |
| ·目的片段与载体的连接转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30-31页 |
| ·中间载体pCZ305-cppSOCS1 的构建 | 第31-32页 |
| ·目的片段的获取 | 第31页 |
| ·载体pCZ305 的处理 | 第31-32页 |
| ·目的片段与载体的连接转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第32页 |
| ·重组载体PCN305-cppSOCS1 的构建 | 第32-34页 |
| ·载体pCN103 的处理 | 第32-33页 |
| ·质粒载体pCZ305-cppSOCS1 的处理 | 第33页 |
| ·电转法在细菌中同源重组 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·病毒的包装 | 第34-36页 |
| ·质粒的大量抽提 | 第34-35页 |
| ·质粒的处理 | 第35页 |
| ·细胞的计数及铺板 | 第35-36页 |
| ·包装质粒质粒的转染 | 第36页 |
| ·病毒的小量扩增及鉴定 | 第36-37页 |
| ·病毒的小量制备 | 第36-37页 |
| ·病毒DNA 的抽提 | 第37页 |
| ·PCR 法鉴定病毒 | 第37页 |
| ·病毒的大量扩增及纯化 | 第37-39页 |
| ·病毒的大量制备 | 第37-38页 |
| ·病毒的纯化 | 第38-39页 |
| ·病毒的滴定（空斑法） | 第39页 |
| ·目的病毒在不同细胞中复制能力的测定 | 第39-40页 |
| ·多种细胞中SOCS1 的表达及Stat3 磷酸化水平检测 | 第40-45页 |
| ·样品的获取 | 第40-41页 |
| ·BCA 法蛋白定量 | 第41页 |
| ·SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳 | 第41-45页 |
| ·病毒感染后SOCS1 在细胞中表达水平的分析 | 第45页 |
| ·样品的获取 | 第45页 |
| ·Western-blot 检测蛋白表达 | 第45页 |
| ·目的病毒在体外对不同细胞的活力影响 | 第45-46页 |
| ·细胞的计数及铺板 | 第45页 |
| ·病毒的稀释和感染 | 第45-46页 |
| ·MTT 法检测细胞活力 | 第46页 |
| ·SOCS1 对Stat3 磷酸化水平及下游效应因子表达的影响 | 第46-48页 |
| ·蛋白样品的获取 | 第46页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·Western-blot 检测相关蛋白表达 | 第47页 |
| ·实时定量PCR 鉴定Stat 下游蛋白Survivin 的mRNA 水平 | 第47-48页 |
| ·SOCS1 诱导肿瘤细胞凋亡 | 第48-49页 |
| ·Hoechst 33342 染色观察细胞凋亡 | 第48页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第48页 |
| ·Western Blot 检测Caspase 3,PARP 的剪接水平 | 第48-49页 |
| ·溶瘤腺病毒AdCN305-cppSOCS1 体内抗肝癌研究 | 第49-52页 |
| ·肝癌Bel-7404 细胞成瘤裸鼠模型的建立实验及瘤内注射重组腺病毒实验 | 第49页 |
| ·肿瘤抑制曲线和荷瘤裸鼠生存率曲线的绘制 | 第49-50页 |
| ·给药肿瘤组织的免疫病理学检测 | 第50-51页 |
| ·给药肿瘤组织的HE 染色 | 第51页 |
| ·TUNEL 法检测肿瘤组织凋亡水平 | 第51-52页 |
| 4 实验结果及分析 | 第52-70页 |
| ·载体PMD-18T-cpp-SOCS1 的构建 | 第52-53页 |
| ·目的基因的扩增 | 第52页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第52-53页 |
| ·转移载体PBS -cppSOCS1 的构建 | 第53-55页 |
| ·目的片段的获得 | 第53-54页 |
| ·PBS 载体的处理 | 第54页 |
| ·正确克隆的鉴定 | 第54-55页 |
| ·转移载体pCZ305-cppSOCS1 的构建 | 第55-57页 |
| ·目的片段的获得 | 第55-56页 |
| ·pCZ305 载体的处理 | 第56页 |
| ·正确克隆的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组质粒PCN305-cppSOCS1 的构建 | 第57-58页 |
| ·正确克隆的鉴定 | 第57-58页 |
| ·目的病毒的小量扩增及鉴定 | 第58-59页 |
| ·PCR 鉴定目的病毒 | 第58-59页 |
| ·SOCS1 在多种肝癌细胞中表达沉默 | 第59-60页 |
| ·Stat3 在多种细胞中的磷酸化水平 | 第60页 |
| ·目的病毒在不同细胞中的复制能力 | 第60-62页 |
| ·病毒感染后SOCS1 在肿瘤细胞中的表达能力 | 第62页 |
| ·目的病毒在体外对不同细胞的活力的影响 | 第62-64页 |
| ·SOCS1 对Stat3 磷酸化及下游癌蛋白的抑制 | 第64-65页 |
| ·SOCS1 诱导肿瘤细胞凋亡 | 第65-67页 |
| ·目的病毒表达治疗肝癌移植瘤体内实验研究 | 第67-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 6 讨论 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79页 |
